耐高溫乳酸菌的選育及應用研究
【摘要】 本實驗從青貯玉米飼料、果渣、牛奶、新鮮的泡菜汁等樣品中篩選耐高溫乳酸菌。通過初篩、復篩,獲得一株耐高溫且產酸能力較強的菌株L1;依據伯杰氏系統細菌學手冊和乳酸菌分類鑒定的標準和描述,對其進行了生理生化特性鑒定并確定其為乳桿菌屬(lacotobacillus)德氏乳桿菌(Lactobacillus delbbruecki)。對L1菌株進行He-Ne激光誘變育種研究,經過多次誘變,在大量突變株中選到了一株耐高溫、產酸能力強的菌株TL1,在70℃高溫培養下突變株菌數量是原菌株的12倍,菌數量最多達1.275×109個/mL;且其具有良好的遺傳穩定性。通過單因素試驗和正交試驗確定突變菌株TL1的最佳增殖培養基組分為:玉米粉16%+麩皮5%;在α-淀粉酶(5u/g玉米粉、90℃、30min)和糖化酶(150u/g玉米粉、55℃、2~3h)酶解作用下,最佳發酵條件為:發酵溫度60℃,發酵時間36h,pH值3.5。在青貯玉米應用試驗中,結果表明:添加TL1菌后,腐敗菌隨著時間的延長總菌數最后為零;感官評定結果顯示:青貯飼料處理組效果明顯地優于對照組的效果;對處理組和對照組的化學分析表明:處理組的丁酸含量降低為零,乳酸和丙酸的含量增加;酸性洗滌纖維含量降低了31.2%;木質素含量降低了5%;氨態氮含量降低了36.4%;干物質消化率提高了43.52%;飼喂試驗結果表明:奶牛的日產奶量可提高1kg以上,有顯著的增產效果。綜合以上結果得出:添加TL1菌后快速降低了青貯飼料pH值,顯著降低了青貯飼料的霉變程度,減少了青貯物料的損耗,提高了青貯飼料的品質。在堆肥應用試驗中,結果表明:添加TL1菌后pH值顯著下降;揮發性有機質含量下降了50%;小麥種子發芽率提高了4%,綜合以上結果可以得出:添加TL1菌株顯著縮短了到達高溫期的時間,且高溫持續時間較長,改善了堆料的質地,促進了腐熟的時間,提高了小麥種子的發芽率。
第一章 文獻綜述 11-34
1 耐高溫乳酸菌的研究概況 11-19
1.1 嗜溫乳酸菌的特性及有關科屬 11
1.2 嗜熱乳酸菌特性及有關科屬 11
1.3 微生物耐高溫機理探究 11-14
1.4 乳酸菌的鑒定方法 14-16
1.5 激光誘變育種 16-17
1.6 相關領域國內外現狀和發展趨勢 17-19
2 乳酸菌在青貯飼料中的應用 19-29
2.1 青貯及乳酸菌青貯添加劑的概念 19
2.2 青貯飼料的特點 19-20
2.3 青貯原理 20-22
2.4 青貯添加劑 22-25
2.5 青貯飼料中添加乳酸菌的目的 25-26
2.6 青貯飼料中乳酸菌種的選擇 26
2.7 影響乳酸菌青貯添加劑效果的因素 26-27
2.8 乳酸菌青貯添加劑的使用效果 27
2.9 相關領域國內外技術現狀和發展趨勢 27-29
3 乳酸菌在生活垃圾堆肥處理中的應用 29-32
3.1 生活垃圾堆肥技術的研究概況 29
3.2 堆肥的基本原理 29-30
3.3 堆肥化微生物的變化過程 30
3.4 微生物在高溫堆肥過程中的作用 30-31
3.5 乳酸菌在堆肥中的作用 31-32
3.6 相關領域的研究概況 32
4 立題意義和本論文的研究內容 32-34
第二章 耐高溫乳酸菌的選育及鑒定 34-43
2.1 材料 34-36
2.2 實驗方法 36-37
2.2.1 乳酸細菌的分離、純化 36-37
2.2.2 耐高溫乳酸細菌的選育 37
2.2.3 耐高溫乳酸菌的鑒定試驗 37
2.3 結果與討論 37-42
2.3.1 分離的菌株 37-38
2.3.2 耐高溫乳酸菌的篩選 38-39
2.3.3 耐高溫乳酸菌鑒定結果 39-42
2.4 本章小結 42-43
第三章 He-Ne激光誘變育種 43-50
3.1 材料及儀器 43
3.2 實驗方法 43-45
3.2.1 菌株L1的He-Ne激光誘變育種 43-44
3.2.1.1 生長曲線的繪制 43
3.2.1.2 誘變參數的選定 43
3.2.1.3 菌懸液的制備 43
3.2.1.4 He-Ne激光誘變 43-44
3.2.1.5 存活率的計算 44
3.2.1.6 正突變率的計算 44
3.2.1.7 正突變菌株的性能考察 44
3.2.2 突變菌株的遺傳穩定性分析 44-45
3.3 結果與討論 45-49
3.3.1 生長曲線測定結果 45
3.3.2 激光誘變試驗結果 45-47
3.3.2.1 第一次激光誘變結果 45-46
3.3.2.2 正突變菌株的獲得 46-47
3.3.3 正突變菌株的性能考察 47-48
3.3.3.1 耐溫能力測定結果 47-48
3.3.3.2 產酸能力測定結果 48
3.3.4 突變菌株的遺傳穩定性分析 48-49
3.4 本章小結 49-50
第四章 突變菌株TL1的發酵條件優化 50-54
4.1 材料 50
4.2 實驗方法 50
4.2.1 突變株TL1菌株發酵條件的優化 50
4.2.1.1 玉米粉濃度對TL1菌株生長的影響 50
4.2.1.2 麩皮濃度對TL1菌株生長的影響 50
4.2.1.3 最佳發酵條件的確定 50
4.3 結果與討論 50-53
4.3.1 玉米粉濃度對TL1菌株生長的影響 50-51
4.3.2 麩皮濃度對TL1菌株生長的影響 51
4.3.3 最佳發酵條件的確定 51-53
4.4 本章小結 53-54
第五章 利用耐高溫乳酸菌進行青貯試驗 54-62
5.1 材料 54
5.2 實驗方法 54-57
5.2.1 青貯飼料的調制 54-55
5.2.2 樣品處理 55
5.2.3 發酵過程中各種菌數量的變化 55
5.2.4 不同處理組感官評定結果 55-56
5.2.5 青貯飼料主要成份分析 56-57
5.2.6 飼喂效果試驗研究 57
5.3 結果與討論 57-60
5.3.1 發酵過程中各種菌數量的變化結果 57-58
5.3.2 不同處理組感官評定結果 58
5.3.3 青貯飼料主要成份分析 58-60
5.3.4 飼喂效果試驗研究結果 60
5.4 本章小結 60-62
第六章 耐高溫乳酸菌在垃圾堆肥處理中的應用 62-68
6.1 材料 62
6.2 實驗方法 62-63
6.2.1 菌種培養及堆肥樣品制備 62
6.2.2 堆肥過程一般工藝參數測定 62-63
6.3 結果與討論 63-67
6.3.1 溫度的變化 63
6.3.2 含水率的變化 63-64
6.3.3 pH值的變化 64-65
6.3.4 揮發性有機質含量的測定 65-66
6.3.5 種子發芽指數(GI) 66-67
6.4 本章小結 67-68
第七章 結論與展望 68-70
7.1 結論 68-69
7.2 展望 69-70
參考文獻 70-77
……略
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