1.1 試驗(yàn)材料

蛋白酶、淀粉酶、β-葡聚糖酶、木聚糖酶、β-甘露聚糖酶、α-半乳糖苷酶均來源于挑戰(zhàn)集團(tuán)，酶活測定分別參照GB/T 28715—2012、GB/T 24401—2009、NY/T911—2004、GB/T 23874—2009、GB/T 36861—2018、Q/HDTZW 0009—2012。

1.2 體外篩選試驗(yàn)

采用單因素完全隨機(jī)設(shè)計(jì)，以玉米-豆粕型日糧（75%玉米+25%豆粕）為研究對(duì)象，按照500g/t飼料的添加量，設(shè)計(jì)每種酶制劑在飼料中的添加水平如表1。

將6種酶制劑按照內(nèi)源酶（蛋白酶和淀粉酶）和非淀粉多糖酶（β-葡聚糖酶、木聚糖酶、β-甘露聚糖酶、α-半乳糖苷酶）設(shè)計(jì)添加量水平。內(nèi)源酶選擇臥式模塊，以豬模擬消化液及流程進(jìn)行篩選（試驗(yàn)設(shè)計(jì)如表2），每個(gè)處理5個(gè)重復(fù)，每個(gè)重復(fù)1根消化管；非淀粉多糖酶酶譜的篩選采用立式模塊進(jìn)行飼料還原糖釋放量的測定（試驗(yàn)設(shè)計(jì)如表3），每個(gè)處理4個(gè)重復(fù)，每個(gè)重復(fù)1根消化管。

1.5 檢測指標(biāo)

1.5.1 仿生消化法測定干物質(zhì)消化率和還原糖釋放量

基于仿生消化系統(tǒng)的飼料干物質(zhì)消化率和還原糖釋放量的測定參考《單胃動(dòng)物仿生消化系統(tǒng)操作手冊》。

1.5.2 生長性能檢測

預(yù)試期為7 d，正式試驗(yàn)期設(shè)定為28d，分別于正試期開始和結(jié)束時(shí)清晨空腹稱重，準(zhǔn)確記錄飼料消耗量，計(jì)算出平均日增重（ADG）、平均日采食量（ADFI）和料重比（F/G）。

平均日增重(ADG，g)=(試驗(yàn)?zāi)┢骄w重-初期平均體重)/試驗(yàn)天數(shù)

平均日采食量(ADFI，g)=試驗(yàn)期總耗料量/試驗(yàn)天數(shù)

料重比(F/G)=平均日采食量/日增重

1.5.3 腹瀉率及發(fā)病率

試驗(yàn)期間仔細(xì)觀察并記錄仔豬腹瀉情況。

腹瀉率(%)=試驗(yàn)全期腹瀉頭次/ （試驗(yàn)頭數(shù)×試驗(yàn)天數(shù)）×100

發(fā)病率(%)=觀察期間內(nèi)發(fā)生的新病例數(shù)/同期平均豬只頭數(shù)×100

1.6 數(shù)據(jù)處理

3.1 復(fù)合酶的體外篩選

我國乳仔豬日糧類型以玉米-豆粕型為主，玉米-豆粕型日糧的主要抗?fàn)I養(yǎng)因子是非淀粉多糖，包括β-葡聚糖、木聚糖、果膠、甘露聚糖等。酶制劑作為一種功能復(fù)雜的生物活性物質(zhì)，雖然不直接提供營養(yǎng)，但與飼料中營養(yǎng)成分的利用率息息相關(guān)。飼料原料在酶制劑作用后的營養(yǎng)價(jià)值如何快速準(zhǔn)確有效的評(píng)定一直是行業(yè)內(nèi)關(guān)心的問題。用體外消化法模擬動(dòng)物腸道消化吸收的生理作用，在體外通過測定加酶前后營養(yǎng)物質(zhì)消化率的變化，可對(duì)酶制劑的作用效果進(jìn)行評(píng)估。Simbaya等的研究表明，采用透析技術(shù)進(jìn)行體外酶解，評(píng)價(jià)和比較了8種碳水化合物酶和13種蛋白酶對(duì)碳水化合物和蛋白質(zhì)體外酶解的效果，研究結(jié)果與體內(nèi)結(jié)果一致性較好。廖睿等的研究表明，當(dāng)仿生系統(tǒng)的上樣量在0.2~0.8 g范圍內(nèi)，還原糖釋放量與上樣量之間呈顯著相關(guān)，仿生消化法測定豬飼料原料還原糖釋放量的重復(fù)性和可加性可滿足定量分析要求。高慶濤等的研究結(jié)果顯示，通過仿生消化法，檢測不同實(shí)驗(yàn)室間玉米和豆粕原料酶水解物能值的總變異系數(shù)，結(jié)果表明該變異系數(shù)可控在1.64%以內(nèi)，再現(xiàn)性符合定量分析要求。本研究的結(jié)果表明，當(dāng)內(nèi)源酶譜不同時(shí)，體外干物質(zhì)消化率差異明顯，值得注意的是，淀粉酶的添加量越大，干物質(zhì)消化率越高，這是因?yàn)槿占Z中淀粉含量高。幼齡動(dòng)物消化系統(tǒng)發(fā)育尚不成熟，淀粉酶分泌不足，添加淀粉酶有利于飼料原料的轉(zhuǎn)變成可消化的小分子化合物。當(dāng)非淀粉多糖酶組成及添加水平不同時(shí)，還原糖釋放量也有所不同。馮定遠(yuǎn)提出組合酶和組合型復(fù)合酶的概念，為復(fù)合酶制劑的開發(fā)提供了理論依據(jù)。復(fù)合酶的酶譜組成與日糧中的非淀粉多糖成分和含量有關(guān)。酶制劑的使用效果與飼糧含抗?fàn)I養(yǎng)因子的種類和比例以及動(dòng)物的種類和生長階段有關(guān)。本研究結(jié)果顯示，不同非淀粉多糖酶酶譜組成對(duì)還原糖釋放量有明顯影響，其中α-半乳糖苷酶效果最好，這可能與豆粕中半乳糖含量相對(duì)較高有關(guān)。綜合內(nèi)源酶與外源酶的作用效果，當(dāng)酶譜為蛋白酶10000U/g、淀粉酶500U/g、β-葡聚糖酶300U/g、木聚糖酶15000U/g、β-甘露聚糖酶2000U/g、α-半乳糖苷酶150U/g時(shí)，酶制劑的效果最優(yōu)。因此，酶制劑的酶譜組成中單酶含量并不是越多越好，添加量應(yīng)在一個(gè)適合范圍內(nèi)，合理的酶制劑的添加水平非常重要。這一點(diǎn)與廖睿的研究結(jié)果一致。

3.2 乳豬復(fù)合酶對(duì)斷奶仔豬生產(chǎn)性能、腹瀉率和發(fā)病率的影響

在仔豬日糧中添加復(fù)合酶，可以補(bǔ)充內(nèi)源酶不足，激活內(nèi)源酶分泌，提高仔豬對(duì)淀粉、蛋白質(zhì)及非淀粉多糖的消化利用，提高腸道健康狀態(tài)。高玉紅等在斷奶仔豬日糧中添加由酸性蛋白酶、糖化酶、淀粉酶、纖維素酶以及果膠酶等組成的復(fù)合酶，仔豬日增重高于對(duì)照組，料重比也有較大程度地改善(P>0.05)，隨著酶量的增加，料重比比對(duì)照組分別降低8.33％、15.42％和17.08％。而李國旺等的研究表明，在基礎(chǔ)日糧中添加0.05%、0.1%和0.15%的乳豬復(fù)合酶，平均日增重分別比對(duì)照組提高5.5%、10.7%、10.9%，腹瀉率分別下降24%、28%、28%。本研究結(jié)果表明，經(jīng)單胃動(dòng)物仿生消化系統(tǒng)篩選的乳豬復(fù)合酶在體內(nèi)作用效果較好。與不加酶組相比，添加乳豬復(fù)合酶對(duì)于日增重有增加趨勢，但差異不顯著(P>0.05)，對(duì)日均采食量無明顯差異(P>0.05)，這可能是因?yàn)榉堑矸鄱嗵敲笇⑷占Z中的抗?fàn)I養(yǎng)因子降解后提高飼料中能量和蛋白質(zhì)的營養(yǎng)利用率。每噸飼料添加量為500 g時(shí)，與對(duì)照組相比料肉比無顯著變化(P<0.05)；每噸添加量為1 000 g時(shí)，料肉比顯著降低了3.65%，差異顯著(P<0.05)，說明添加量的適當(dāng)增加有利于料肉比的減小。該仔豬專用復(fù)合酶對(duì)斷奶仔豬腹瀉率和發(fā)病率具有明顯效果，與不加酶組相比，每噸飼料添加500 g和1000 g復(fù)合酶，仔豬的腹瀉率分別顯著降低了 37.57%(P<0.05)和 87.03%(P<0.05)；相對(duì)于對(duì)照組，添加500 g乳豬酶組的發(fā)病率沒有顯著變化，而添加1 000 g組的發(fā)病率顯著降低了79.17%(P<0.05)。仔豬專用復(fù)合酶對(duì)于提高仔豬抗病能力具有較好的作用效果，但是在合理范圍內(nèi)較大量添加可更好改善乳仔豬的腸道微生態(tài)健康，減少腹瀉和疾病的發(fā)生，該結(jié)果趨勢與李國旺等的結(jié)果一致。