乳酸菌和酵母菌復合制劑對肉仔雞生長性能、屠宰性能和腸道健康的影響
導 讀
現代畜牧生產中，抗生素被廣泛用作生長促進劑，但因抗藥性、藥物殘留等問題，飼用抗生素在畜牧養殖中的限用和禁用已為大勢所趨，而抗生素替代品的研究成為動物營養學的研究熱點之一，該項研究也因此對維持畜禽健康和生態環境具有重要意義。乳酸菌對腸道黏膜表面的黏附能力，是拮抗腸道病原微生物定植及集群生長的先決條件，并且對免疫調節及促進受損黏膜的修復具重要意義。乳酸菌和酵母菌通過代謝產物的互補和群體感應作用，相互促進生長，因此乳酸菌和酵母菌復合制劑在腸道等環境里比單獨添加乳酸菌或酵母菌生長更好，也能更充分地發揮益生作用。在飼糧或飲水中添加乳酸菌或酵母菌可顯著提高肉雞體重，降低料重比(feed to gain ratio，F/G)，增加絨毛高度和絨毛高度/隱窩深度(V/C)值，增加腸道有益菌數量，降低有害菌數量，且乳酸菌或酵母菌組改善生長性能效果顯著優于抗生素組。但目前關于乳酸菌和酵母菌復合制劑替代抗生素以及與抗生素聯合使用的研究還不充分。因此，本試驗旨在研究乳酸菌和酵母菌的復合制劑替代抗生素以及聯合使用對愛拔益加(AA)肉仔雞生長性能、屠宰性能以及腸道健康的影響，為該微生態制劑在肉仔雞養殖生產中的合理應用提供理論依據。
1 材料與方法
1．1 試驗材料
乳酸菌和酵母菌復合制劑：乳酸菌(BCRC16092)活菌數為2.5×109 CFU/g(實測2.3×106 CFU/g)，酵母菌(BCRC 20262)活菌數為1.3x109 CFU/g(實測1.3×106CFU/g)。維吉尼亞霉素：有效成份含量50％。
1.2 試驗設計與飼養管理
試驗隨機選取健康、體重相近[(40.3±5.0)g]的1日齡AA肉仔雞公雛400只，隨機分為4組，每組5個重復，每重復20只雞。對照組飼喂基礎飼糧，試驗組分別飼喂在基礎飼糧中添加30 mg/kg維吉尼亞霉素(VM組)、15 mg/kg維吉尼亞霉素+1 000 mg/kg乳酸菌和酵母菌復合制劑(VM+LS組)、1 000 mg/kg乳酸菌和酵母菌復合制劑(LS組)的試驗飼糧。采用4層立體網上籠養，試驗分前期(1~21日齡)和后期(22~42日齡)，共42 d?；A飼糧(組成及營養水平見表1)參照NRC(1994)和《雞飼養標準》(NY/T 33—2004)，結合《AA肉仔雞飼養手冊》配制粉料，配合飼料再經冷壓制粒(制粒過程中最高溫度65℃左右)，制粒后迅速冷卻顆粒料，以減小制粒溫度對乳酸菌和酵母菌復合制劑的影響，最終以顆粒料形式進行飼喂。
試驗期問自由飲食、飲水，自然光照加人工補光，1~7日齡每天光照24 h，8 日齡后23 h。試驗前3 d室溫33℃ ，此后每周降低2℃ ，直到24℃并維持。按照《AA肉仔雞飼養管理手冊》操作，常規免疫、消毒，試驗雞舍良好通風。試驗過程中，每日24 h記錄雞舍溫度和濕度，清掃衛生，記錄死淘雞數。
1.3 測定指標與方法
1.3.1 生長性能
每天觀察雞的生長、發病及死亡情況，以重復為單位，記錄死淘數和耗料量；分別于1、21和42日齡09：00之前，以重復為單位空腹稱重，統計各重復試驗雞1~21、22~42日齡耗料量，計算21和42日齡的平均體重，1~21、22~42和1~42日齡的平均日增重(average daily gain，ADG)、平均日采食量(average daily feed intake，ADFI)、F/G和死亡率。
1.3.2 屠宰性能
分別于肉仔雞的21和42日齡，每重復選取2只體重接近該重復平均值的肉仔雞，頸靜脈放血屠宰，分離胸肌、腿肌和腹脂，稱重并記錄，按照全國家禽育種委員會的家禽生產性能計算方法，計算全凈膛率、胸肌率、腿肌率和腹脂率。公式如下：
全凈膛率(％)=100x全凈膛重/宰前體重；
胸肌率(％)=100x胸肌重/全凈膛重；
腿肌率(％)=100x腿肌重/全凈膛重；
腹脂率(％)=100x腹脂重/(全凈膛重+腹脂重)。
其中，宰前體重指在屠宰前停飼12 h后的重量。
1.3.3 腸道黏膜形態
分別于21和42日齡，每重復隨機選取1只體重接近該重復平均值的肉仔雞，屠宰，剝離出十二指腸、空腸和回腸，各自截取中段約1 cm 的腸道組織，用預冷的生理鹽水緩緩沖洗，浸入pH為7.4的福爾馬林固定液，4℃冰箱保存。將固定好的腸道組織進行石蠟切片：組織脫水→透明→浸蠟→包埋→不連續切(厚度為6~8 μm)→蘇木精→伊紅(HE)染色處理→封片待測黏膜形態。從每20張中取1張切片，每個腸道組織取5張切片，于光學顯微鏡下觀察形態。每個切片隨機抽取5個非連續性視野(保證絨毛完整且走向平直)，每個視野統計3組數據，測定絨毛高度、隱窩深度，并計算V/C值。每個指標選取9個值計算。切片制備及相關指標的測定由北京嘉藍海生物科技有限公司操作。
1.3.4 盲腸菌群數量
分別于21和42日齡，從每個重復中隨機抽取1只空腹(自由飲水)12 h，且接近平均體重的肉雞稱重，采用心臟注入空氣法處死雞，截取盲腸腸段，液氮保存至分析。采用平板菌落計數法檢測盲腸食糜內菌群。從液氮中取出樣品，在無菌操作室內用酒精棉球消毒各結扎口，取盲腸食糜1 g加入盛9 mL 0.9％無菌生理鹽水的試管中搖勻，小型振動器充分混勻；取0.5 mL該懸浮液加入到盛4.5 mL無菌0.9％生理鹽水的試管中，混勻，重復同樣操作，直至稀釋倍數為10-4~10-6的3個梯度，分別取0.1 mL稀釋液加入準備好的平板培養皿中，用滅菌的曲玻棒將菌液小心涂勻至整個平板培養皿。每個稀釋梯度做3個重復。大腸桿菌接種于伊紅美藍(EMB)平板培養基上，37℃有氧培養箱內培養24 h；乳酸菌接種于MRS平板培養基上，37℃的CO2培養箱內培養48 h。將培養后的平板培養皿進行菌落計數，以菌落數量在30~300個之間的平皿計數。菌群數量以每克盲腸食糜所含細菌群落總數的對數lg(CFU/g)表示。
1.4 統計分析
數據以“平均值±標準差”表示，采用SPSS16.0軟件進行數據分析。前期和后期生長性能采用一般線性模型(general linear model)的Repeated Measures過程分析，若球形檢驗結果P>0.05則進行單因素方差分析(one-way ANOVA)，若P<0.135則用Multivariate過程對4個處理進行分析。死亡率采用卡方檢驗。其余指標數據采用one-way ANOVA對4個處理進行分析，當有顯著性差異時再采用Duncan氏法進行多重比較，以P<0.05為差異顯著性標準。
2 結果與分析
2.1 乳酸菌和酵母菌復合制劑對肉仔雞生長性能的影響
由表2可知，1~21日齡，與對照組相比，VM、VM+LS和LS組的ADG、ADFI、F/G、死亡率以及21日齡體重均無顯著變化(P>0.05)。22~42日齡，與對照組相比，VM+LS和LS組的ADG顯著提高(P<0.05)，F/G顯著降低(P
2.2 乳酸菌和酵母菌復合制劑肉仔雞屠宰性能的影響
由表3可知，飼糧中添加乳酸菌和酵母菌復合制劑及其與維吉尼亞霉素聯用對21日齡肉仔雞的屠宰性能無顯著影響(P>0.05)；42 日齡，VM+LS組肉仔雞全凈膛率顯著高于對照組(P
2.3 乳酸菌和酵母菌復合制劑對肉仔雞腸道黏膜形態的影響
由表4可知，與對照組相比，21日齡 ，LS組的十二指腸絨毛高度及V/C值顯著提高(P<0.05)；LS組的空腸絨毛高度及V/C值顯著提高(P<0.05)，隱窩深度顯著降低(P<0.05)；VM+LS和LS組回腸的V/C值顯著提高(P<0.05)。與對照組相比，42日齡，VM+LS和LS組的十二指腸和空腸絨毛高度及V/C值顯著提高(P
2.4 乳酸菌和酵母菌復合制劑對肉仔雞盲腸菌群數量的影響
由表5可知，21日齡，與對照組相比，VM、VM+LS和LS組盲腸大腸桿菌和乳酸桿菌數量以及大腸桿菌/乳酸桿菌值均無顯著差異(P>0.05)。42日齡，與對照組相比，VM+LS和LS組的盲腸大腸桿菌數量和大腸桿菌/乳酸桿菌值顯著降低(P
3 討 論
3.1 乳酸菌和酵母菌復合制劑對肉仔雞生長性能的影響
畜禽的ADG和F/G是反映益生菌制劑有效性和經濟性的重要指標。王利紅研究表明，飼糧中添加109 CFU/kg的乳酸菌可顯著提高肉仔雞42日齡體重，顯著降低1~42日齡的F/G，而在肉仔雞飲水中添加乳酸菌，肉仔雞的ADG顯著提高，F/G顯著降低；Gil De Los Santos等研究表明，飼糧中添加1x107 CFU/g活酵母菌顯著提高肉仔雞BW，說明無論是乳酸菌還是酵母菌都可顯著改善肉仔雞生長性能。這些研究與本試驗結果相一致，即在肉仔雞飼糧中添加1 000 mg/kg乳酸菌和酵母菌復合制劑可顯著提高生長性能，且本試驗中乳酸菌和酵母菌復合制劑組的22~42日齡ADG顯著高于維吉尼亞霉素組、F/G顯著低于維吉尼亞霉素組。
維吉尼亞霉素能夠不可逆地抑制細菌蛋白質的合成，最終導致細菌死亡，通常用于預防和治療革蘭氏陽性菌的感染。目前，乳酸菌或酵母菌與抗生素聯合使用的研究較少，本試驗中用乳酸菌和酵母菌復合制劑替代部分維吉尼亞霉素，結果表明15 mg/kg維吉尼亞霉素與1 000 mg/kg乳酸菌和酵母菌聯用組的1~42日齡ADG和42日齡體重均顯著高于30 mg/kg維吉尼亞霉素組。說明1 000 mg/kg乳酸菌和酵母菌復合制劑與15 mg/kg維吉尼亞霉素聯合使用促生長作用效果更好，二者之間可能存在協同作用，具體機制有待進一步研究。
3.2 乳酸菌和酵母菌復合制劑對肉仔雞屠宰性能的影響
乳酸菌可顯著提高肉仔雞的全凈膛率和胸肌率，李菊等研究表明，與對照組和100 mg/kg金霉素組相比，5 000 mg/kg乳酸菌組的胸肌率分別顯著提高了7.15％和4.38％。微生態制劑與抗生素聯用對屠宰性能影響的研究較少，本試驗中，乳酸菌和酵母菌復合制劑組及其與維吉尼亞霉素聯用組與對照組相比，胸肌率分別顯著提高了4.33％和4.57％，說明乳酸菌和酵母菌復合制劑及其與維吉尼亞霉素聯用均能顯著提高42日齡肉仔雞的屠宰性能。當肉仔雞飼糧中分別添加5~20 mg/kg維吉尼亞霉素對屠宰性能無顯著影響，而本試驗結果顯示，飼糧添加30 mg/kg維吉尼亞霉素可顯著提高胸肌率；而維吉尼亞霉素劑量減少至15 mg/kg，同時添加1 000 mg/kg乳酸菌和酵母菌復合制劑時，全凈膛率和胸肌率都顯著提高，可能是維吉尼亞霉素與乳酸菌和酵母菌復合制劑聯合使用時存在協同作用，但還需后續試驗驗證。
3.3 乳酸菌和酵母菌復合制劑對肉仔雞腸道健康的影響
腸道是肉仔雞主要的消化吸收器官，當絨毛高度增加時，小腸的消化吸收功能增強；隱窩深度變淺時，機體消化道發育更成熟。V/C值升高，表明小腸消化吸收功能增強，腸黏膜結構改善。許多研究表明，肉仔雞飼糧中添加乳酸菌，腸道絨毛高度及V/C值顯著提高，隱窩深度顯著降低 。本試驗結果表明，21和42 日齡時，飼糧添加1 000 mg/kg乳酸菌和酵母菌復合制劑使得空腸絨毛高度和V/C值顯著升高，與前人研究結果相近。此外，本試驗中，與添加30 mg/kg維吉尼亞霉素相比，添加1 000 mg/kg乳酸菌和酵母菌復合制劑可顯著改善腸道黏膜形態，說明該益生菌復合制劑更利于維持腸道形態健康。維吉尼亞霉素主要在腸道中起到殺菌作用，減少有害菌對腸黏膜的損害，乳酸菌可通過刺激腸道黏液蛋白2的表達來保護肉仔雞小腸黏膜，二者協同作用改善腸道健康。徐基利等 研究表明，在肉仔雞飼糧中分別添加乳酸菌和黃霉素，乳酸菌組的腸道絨毛高度顯著增加，隱窩深度顯著降低，抗生素組十二指腸絨毛高度和隱窩深度沒有顯著變化。本試驗中，與對照組相比，維吉尼亞霉素組十二指腸、回腸和空腸的絨毛高度和隱窩深度均無顯著變化，而維吉尼亞霉素與乳酸菌和酵母菌復合制劑聯用組的42日齡十二指腸和空腸的絨毛高度和V/C值顯著升高，說明維吉尼亞霉素與乳酸菌和酵母菌復合制劑聯合使用可改善腸道黏膜形態，從而提高腸道對營養物質的吸收能力，提高生長性能。
動物腸道內主要依靠有益菌(乳酸桿菌、雙歧桿菌等)維持微生物區系平衡。有益菌通過產生細菌素、抗生素和其代謝產物，以及爭奪空問、營養，從而阻止有害菌群過度繁殖，保持微生物區系的穩定性，從而提高生長性能。研究證實飼糧中添加乳酸菌能夠顯著增加盲腸乳酸桿菌數量。本試驗結果表明，乳酸菌和酵母菌復合制劑組的盲腸大腸桿菌數量和大腸桿菌/乳酸桿菌值顯著降低，與崔一酷等 在肉仔雞飼糧中添加2 000 mg/kg植物乳酸菌的研究結果相一致，而本試驗中維吉尼亞霉素組的盲腸大腸桿菌數量沒有顯著變化，可能是因為維吉尼亞霉素主要是改善前段腸道菌群穩定性。
維吉尼亞霉素通過抑制細菌核糖體的合成殺死部分革蘭氏陽性細菌，乳酸菌和酵母菌通過拮抗作用、干擾作用和屏障作用等減少腸道有害菌的數量，二者協同增加腸道有益菌數量和種類，減少有害菌的數量，改善腸道健康。Dumonceaux等 研究表明，在肉仔雞飼糧中添加20 mg/kg維吉尼亞霉素，可顯著增加小腸前段的菌群穩定性。本試驗中乳酸菌和酵母菌復合制劑與維吉尼亞霉素聯合使用能顯著降低盲腸大腸桿菌數量和大腸桿菌/乳酸桿菌值，說明1 000 mg/kg乳酸菌和酵母菌復合制劑與15 mg/kg維吉尼亞霉素通過在腸道內協同提高腸道菌群的穩定性，提高腸道吸收能力，從而改善肉仔雞的生長性能。
4 結 論
① 乳酸菌和酵母菌復合制劑及其與維吉尼亞霉素聯用均能改善肉仔雞生長性能和飼料效率，且維吉尼亞霉素與乳酸菌和酵母菌復合制劑聯用效果更優。
② 乳酸菌和酵母菌復合制劑及其與維吉尼亞霉素聯用均能改善腸道黏膜形態，降低盲腸大腸桿菌數量，改善腸道微生物區系，促進生長。
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