近年來，隨著畜牧業(yè)的不斷發(fā)展，飼料資源越發(fā)短缺。豆粕作為一種優(yōu)質(zhì)的蛋白質(zhì)飼料被廣泛的用于全世界畜牧業(yè)生產(chǎn)中，盡管我國大豆產(chǎn)量逐年上升，2020年產(chǎn)量已達(dá)1960.18萬噸，但國產(chǎn)大豆無法滿足飼料用豆粕的缺口，2020年進(jìn)口大豆10031.45萬噸，其中進(jìn)口大豆的80%被用于加工成為畜禽飼料(數(shù)據(jù)來自國家統(tǒng)計(jì)局)。我國大豆產(chǎn)量不足，且近年來豆粕價(jià)格波動(dòng)嚴(yán)重，制約著我國畜牧業(yè)的發(fā)展。為解決供需矛盾,降低養(yǎng)殖成本，迫切需要更多優(yōu)質(zhì)，廉價(jià)的蛋白質(zhì)飼料替代豆粕，以解決養(yǎng)殖業(yè)蛋白質(zhì)飼料來源問題。餅粕是油料榨油后剩余的固體部分，蛋白質(zhì)含量一般在30%以上，是良好的豆粕替代品。但餅粕類飼料中含有大量的抗?fàn)I養(yǎng)因子，如游離棉酚、酚基葡糖苷、2-羥基牛蒡等。因此，過量的餅粕類飼料添加到動(dòng)物飼糧中會(huì)對(duì)動(dòng)物的生長(zhǎng)性能和營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)表觀消化率產(chǎn)生負(fù)面影響,限制了餅粕類飼料的廣泛應(yīng)用｡

益生菌發(fā)酵飼料能夠提高斷奶仔豬的生長(zhǎng)性能，有效調(diào)節(jié)斷奶仔豬的腸道微生物平衡，在微生物發(fā)酵后餅粕類飼料中的植物蛋白質(zhì)被微生物分解為易于吸收的小分子蛋白肽，并且抗?fàn)I養(yǎng)因子水平會(huì)顯著降低，益生菌及其代謝產(chǎn)物還有利于抑制腸道中的致病菌并提高營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)表觀消化率。研究表明，在飼糧中用發(fā)酵棉籽粕部分替代部分豆粕后，對(duì)促進(jìn)肉雞的生長(zhǎng)性能、減緩脂肪沉積有積極的作用，同時(shí)可以降低斷奶仔豬的腹瀉率，改善腸道菌群。研究發(fā)現(xiàn)，在飼糧中添加發(fā)酵菜籽粕對(duì)育肥豬生長(zhǎng)性能沒有負(fù)面影響。由此可知,餅粕類飼料在經(jīng)過微生物發(fā)酵后可以作為一種良好的豆粕替代品｡

仔豬在早期斷奶后，腸道沒有發(fā)育完善，同時(shí)其營(yíng)養(yǎng)來源由易于被吸收的母乳變?yōu)椴灰妆幌盏墓虘B(tài)飼料，容易因腸道應(yīng)激導(dǎo)致出現(xiàn)腹瀉，食欲減退等現(xiàn)象。飼喂抗生素可以有效解決這一問題，但自“禁抗令”頒布以來，尋找抗生素的替代產(chǎn)品顯得尤為關(guān)鍵，而發(fā)酵飼料具有完善腸道功能，優(yōu)化腸道菌群結(jié)構(gòu)和降低腹瀉率的作用，可以有效地減少仔豬斷奶應(yīng)激。例如，研究表明，在飼糧中用6%的發(fā)酵棉籽粕替代豆粕可以使斷奶仔豬腹瀉率顯著降低49.37%。單一餅粕類飼料中的氨基酸相比于豆粕，無法滿足仔豬的氨基酸需要，不同來源的蛋白質(zhì)飼料可以平衡氨基酸組成，且存在著的活性因子可以促進(jìn)仔豬腸道的發(fā)育，減少應(yīng)激對(duì)仔豬帶來的傷害，提高生長(zhǎng)性能，減低死亡率，幫助仔豬安全度過斷奶階段。基于此，本試驗(yàn)將不同餅粕源發(fā)酵飼料及其復(fù)合物添加到飼糧中，探究其對(duì)斷奶仔豬生長(zhǎng)性能、腹瀉率、血清生化指標(biāo)和腸道菌群的影響｡

材料與方法

1.1試驗(yàn)材料

棉籽粕、葵花籽粕、紅花籽粕、麩皮和玉米粉購買自石河子市農(nóng)貿(mào)市場(chǎng)。熱帶假絲酵母ZD-3和釀酒酵母。根據(jù)實(shí)驗(yàn)室前期優(yōu)化，發(fā)酵底物為餅粕∶玉米∶麩皮=90∶5∶5，底物含水量為40%。棉籽粕和葵花籽粕接種熱帶假絲酵母ZD-3，紅花籽粕接種釀酒酵母CICC1001，每100g底物接種8mL菌液(5.0×108CFU/g)和0.2g酸性蛋白酶，混合均勻后放入30℃培養(yǎng)箱培養(yǎng)48h。按照發(fā)酵后3種餅粕的氨基酸組成和仔豬的氨基酸需要制備復(fù)合發(fā)酵餅粕(發(fā)酵棉籽粕∶發(fā)酵葵花籽粕∶發(fā)酵紅花籽粕=3∶1∶1)｡

1.2 試驗(yàn)設(shè)計(jì)和飼養(yǎng)管理

選取120頭28日齡“杜洛克×長(zhǎng)白×大約克夏”三元雜交斷奶仔豬，體重(8.42±0.76)kg。隨機(jī)分成5組，每組6個(gè)重復(fù)，每個(gè)重復(fù)4頭豬。參照《豬營(yíng)養(yǎng)需要量》(GB/T39235—2020)設(shè)計(jì)飼料配方，試驗(yàn)飼糧組成及營(yíng)養(yǎng)水平見表1。對(duì)照組(C組)飼喂基礎(chǔ)飼糧；4個(gè)試驗(yàn)組(M組、K組、H組和F組)分別用6%的不同餅粕源發(fā)酵飼料替代基礎(chǔ)飼糧中6%的豆粕,其中，M組為發(fā)酵棉籽粕，K組為發(fā)酵葵花籽粕，H組為發(fā)酵紅花籽粕，F(xiàn)組為復(fù)合發(fā)酵餅粕(發(fā)酵棉籽粕、發(fā)酵葵花籽粕和發(fā)酵紅花籽粕按照3∶1∶1混合而成)。預(yù)試期5天，正試期21天。試驗(yàn)在石河子市科盛種豬場(chǎng)進(jìn)行，試驗(yàn)豬自由飲水和采食，防疫消毒流程均按照試驗(yàn)豬場(chǎng)管理規(guī)定進(jìn)行｡

1.3 樣品采集和指標(biāo)測(cè)定

1.3.1 飼糧營(yíng)養(yǎng)水平的測(cè)定

按照《飼料分析及飼料質(zhì)量檢測(cè)技術(shù)》中的方法對(duì)飼糧中粗蛋白質(zhì)、鈣、總磷等營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)含量進(jìn)行測(cè)定｡

1.3.2 生長(zhǎng)性能和腹瀉率的測(cè)定

在試驗(yàn)開始和結(jié)束時(shí)對(duì)空腹過夜的仔豬進(jìn)行稱重，每天記錄各欄的仔豬采食量，計(jì)算平均日增重(ADG)，平均日采食量(ADFI)及料重比(F/G)。每天10:00和18:00觀察記錄肛門處被糞便污染的仔豬頭數(shù)和糞便形態(tài)，計(jì)算腹瀉率。計(jì)算公式如下:

ADG(g/d)=(末重-初重)/試驗(yàn)天數(shù);

ADFI(g/d)=總采食量/(試驗(yàn)豬頭數(shù)×試驗(yàn)天數(shù));

F/G=試驗(yàn)期總耗料量/總增重;腹瀉率(%)=100×腹瀉仔豬頭數(shù)/(每組豬頭數(shù)×試驗(yàn)天數(shù))｡ 

1.3.3 營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)表觀消化率的測(cè)定

在試驗(yàn)結(jié)束前3天，每天18:00從每個(gè)重復(fù)中取約100g無污染糞便，加入少量濃硫酸(H2SO4)固氮,存放于-20℃冰箱中。檢測(cè)樣品時(shí)，將每個(gè)重復(fù)3天收集的糞樣均勻混合，在65℃干燥箱中烘48~72h去除樣品中的游離水、用粉碎機(jī)將樣品粉碎過40目篩，4℃密封保存待測(cè)。以樣品中的鹽酸不溶灰分為內(nèi)指示劑，計(jì)算干物質(zhì)、粗蛋白質(zhì)、粗脂肪、有機(jī)物、中性洗滌纖維表觀消化率。干物質(zhì)、粗蛋白質(zhì)、粗脂肪、有機(jī)物、中性洗滌纖維按照《飼料分析及飼料質(zhì)量檢測(cè)技術(shù)》中的方法進(jìn)行測(cè)定，鹽酸不溶灰分含量按照GB/T23742—2009進(jìn)行測(cè)定。營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)表觀消化率計(jì)算公式如下:

某營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)表觀消化率(%)=100-[(飼糧中鹽酸不溶灰分含量/糞中鹽酸不溶灰分含量)×(糞中該營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)含量/飼糧中該營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)含量)×100]｡

1.3.4 血清生化指標(biāo)的測(cè)定

在試驗(yàn)結(jié)束后，每個(gè)重復(fù)隨機(jī)選取1頭空腹過夜的仔豬，用非抗凝管進(jìn)行前腔靜脈采血，靜置于4℃冰箱1h后，4000r/min離心20min，分離血清，-20℃保存待測(cè)。采用試劑盒測(cè)定血清總蛋白(TP)、白蛋白(ALB)、球蛋白(GLB)、尿素氮(UN)、總膽固醇(TC)、甘油三酯(TG)、高密度脂蛋白(HDL)、低密度脂蛋白(LDL)含量、所有試劑盒、｡

1.3.5糞便揮發(fā)性脂肪酸含量的測(cè)定

試驗(yàn)結(jié)束時(shí)，從每個(gè)重復(fù)中隨機(jī)選擇1頭豬，收集其新鮮糞便，經(jīng)液氮速凍后轉(zhuǎn)移到-80℃冰箱保存、待測(cè)。糞便揮發(fā)性脂肪酸含量測(cè)定參照的方法。將樣品放置4℃冰箱解凍，準(zhǔn)確稱量樣品0.5g，將樣本用超純水稀釋5倍，加入0.2mL偏磷酸，5000r/min離心10min。取上清液過0.45μm的水系膜后采用美國安捷倫氣相色譜儀(Agilent-7890B)測(cè)定樣品中揮發(fā)性脂肪酸(乙酸､丙酸､丁酸)含量，色譜柱為DB-WAX(30m×0.25mm×0.50μm)｡

1.3.6糞便微生物16SrRNA測(cè)序

將1.3.5中每個(gè)重復(fù)收集的新鮮糞便按照試劑盒說明書進(jìn)行基因組DNA提取，基因組DNA完整性利用1%瓊脂糖凝膠電泳檢測(cè)，-20℃保存。具體流程為:設(shè)計(jì)合成引物接頭→PCR擴(kuò)增與產(chǎn)物純化→PCR產(chǎn)物定量與均一化→構(gòu)建PE文庫→Illumina測(cè)序。利用IlluminaMiSeq測(cè)序平臺(tái)對(duì)樣品進(jìn)行質(zhì)控和過濾后，操作分類單元(OTU)聚類方式為按照97%相似性對(duì)非重復(fù)序列(不含單序列)進(jìn)行，同時(shí)去除嵌合體，得到OTU的代表序列。隨后按照數(shù)據(jù)分析云平臺(tái)的說明進(jìn)行Alpha多樣性､Beta多樣性和相關(guān)性分析｡

1.4統(tǒng)計(jì)分析

試驗(yàn)數(shù)據(jù)經(jīng)Excel2013初步整理､計(jì)算､統(tǒng)計(jì)后，使用SPSS20.0軟件進(jìn)行單因素方差分析(one⁃wayANOVA)，并用Duncan氏法進(jìn)行多重比較檢驗(yàn)分析。結(jié)果以“平均值±標(biāo)準(zhǔn)差”表示，P<0.05表示差異顯著｡

結(jié)果與分析

2.1飼糧中添加不同餅粕源發(fā)酵飼料對(duì)斷奶仔豬生長(zhǎng)性能及腹瀉率的影響

由表2可知，各組之間初重和末重均無顯著差異(P>0.05)。與C組相比,F組的腹瀉率顯著降低了26.65%(P 

2.2 飼糧中添加不同餅粕源發(fā)酵飼料對(duì)斷奶仔豬營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)表觀消化率的影響

由表3可知，與C組相比，F(xiàn)組的干物質(zhì)、粗蛋白質(zhì)、有機(jī)物、中性洗滌纖維表觀消化率分別顯著升高了12.24%、17.82%、0.06%、14.11%(P<0.05)，H組的粗蛋白質(zhì)表觀消化率顯著升高了17.78%(P<0.05)｡ 

2.3 飼糧中添加不同餅粕源發(fā)酵飼料對(duì)斷奶仔豬血清生化指標(biāo)的影響

由表4所示，各組之間血清TP、ALB、GLB、UN、TC、TG、HDL和LD含量均無顯著差異(P>0.05)。與C組相比，F(xiàn)組的血清TP、GLB含量分別升高了3.48%和8.81%(P>0.05)，血清TC和TG含量分別降低了6.40%和10.40%(P>0.05)｡ 

2.4飼糧中添加不同餅粕源發(fā)酵飼料對(duì)斷奶仔豬腸道菌群的影響

2.4.1α多樣性和β多樣性分析

α多樣性指數(shù)包括Shannon指數(shù)、Simpson指數(shù)、Ace指數(shù)和Chao指數(shù)。Ace指數(shù)和Chao指數(shù)反映出樣本中群落物種的種類，即豐富度。由表5可知，與C組相比，M組、K組、H組、F組的Ace指數(shù)和Chao指數(shù)顯著升高(P<0.05)，說明在飼糧中添加不同餅粕源發(fā)酵飼料后提高了腸道菌群的豐富度。Shannon指數(shù)和Simpson指數(shù)受到樣本均勻度的影響，即物種的多樣性，Shannon指數(shù)與樣本物種多樣性呈正相關(guān)，而Simpson指數(shù)與樣本物種多樣性呈負(fù)相關(guān)。與C組相比，M組、K組、H組和F組的Shannon指數(shù)顯著升高(P<0.05)，Simpson指數(shù)顯著降低(P<0.05)，說明各試驗(yàn)組的豐富度和均勻度均高于對(duì)照組｡

β多樣性分析通過對(duì)組間不同微生物群落多樣性進(jìn)行比較分析，體現(xiàn)出不同組間微生物群落組成的相似性或差異性。由圖1可知，飼糧中添加不同餅粕源發(fā)酵飼料后，M組、K組、H組、F組顯示出了與C組不同的聚類，說明不同餅粕源發(fā)酵飼料改變了腸道菌群群落的組成｡

2.4.2 菌群結(jié)構(gòu)和組成差異分析

Venn圖體現(xiàn)多組間所共有和獨(dú)有的OTU數(shù)目，可以直觀的體現(xiàn)組間物種組成情況。由圖2可知，C組、M組、K組、H組和F組的糞便中OTU數(shù)目，分別為704、939、952、923、826個(gè)，其中共有的OTU數(shù)目為480個(gè)，C組、M組、K組、H組和F組獨(dú)有的OTU數(shù)目分別為29、34、50、33、23個(gè)｡

通過圖3和表6可知，在門水平上，5組均以厚壁菌門(Firmicutes)、擬桿菌門(Bacteroidota)為主，其中C組、M組、K組、H組和F組的Firmi-cutes和Bacteroidota相對(duì)豐度分別為92.09%、85.71%、84.70%、91.01%、84.57%和1.97%、11.79%、11.31%、4.70%、8.36%。與C組相比，M組、K組、H組和F組的Bacteroidota相對(duì)豐度分別提高了9.82%(P<0.05)、9.34%(P

在屬水平上，對(duì)相對(duì)豐度前10的菌屬進(jìn)行分析，C組各樣本微生物主要分布在狹義梭菌屬1，乳酸菌屬(Lactoba⁃cillus)和土孢桿菌屬(Terrisporobacter)，占總比的77.88%，其他菌屬占比較低，而M組、K組、H組和F組各菌屬分布均勻度提高、這與α多樣性結(jié)果相互印證。與C組相比，M組、K組、H組和F組的相對(duì)豐度顯著降低(P<0.05)，Lactobacillus相對(duì)豐度分別顯著提高了9.93%､7.81%、16.20%、8.06%(P<0.05)，Ter⁃risporobacter的相對(duì)豐度分別顯著降低了7.70%、8.54%、7.91%､10.02%(P

線性判別分析效應(yīng)大小(LEfSe)是一種用于發(fā)現(xiàn)高維生物標(biāo)識(shí)和揭示基因組特征的軟件，通過采用線性判別分析(LDA)可以估算每個(gè)組分(物種)相對(duì)豐度對(duì)差異效果。由圖4可知，通過LEfSe分析(LDA閾值為3)發(fā)現(xiàn)，未分類消化鏈球菌科和棒狀桿菌屬(Corynebacterium)在C組中顯著富集；norank_f_Muribaculaceae､普雷沃氏菌科NK3B31群(Prevotellaceae_NK3B31_group)､毛螺菌科NK4A136群(Lachnospiraceae_NK4A136_group)等7個(gè)菌屬在M組中顯著富集；未分類梭菌屬UCG⁃014(norank_f_norank_o_Clostridia_UCG-014)、瓊脂桿菌屬(Agathobacter)等28個(gè)菌屬在K組中顯著富集、普拉梭菌屬(Faecalibac-terium)等5個(gè)菌屬在H組中顯著富集;考拉桿菌屬､厚壁菌門未分類菌屬(unclassified_p_Firmicutes)､丁酸球菌屬(Butyrici⁃coccus)等12個(gè)菌屬在F組中顯著富集｡

2.5 飼糧中添加不同餅粕源發(fā)酵飼料對(duì)斷奶仔豬糞便中揮發(fā)性脂肪酸含量的影響

由表7可知，各組之間糞便中乙酸、丙酸含量均無顯著差異(P>0.05)。F組的糞便中丁酸含量較C組、M組、H組分別顯著提升了42.98%、36.40%、37.18%(P<0.05)｡ 

2.6 腸道菌群與相關(guān)指標(biāo)的相關(guān)性分析

相關(guān)性熱圖(heatmap)通過相關(guān)性數(shù)值可視化展示樣本中不同的物種與試驗(yàn)數(shù)據(jù)之間的關(guān)系，評(píng)估了腸道菌群與生長(zhǎng)性能、腹瀉率、揮發(fā)性脂肪酸含量和營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)表觀消化率之間的相關(guān)性。由圖5可知，乙酸含量與未分類毛螺菌科、普氏菌屬、文肯菌科RC9腸道群相對(duì)豐度呈顯著負(fù)相關(guān)(P<0.05)，相關(guān)系數(shù)為-0.38~-0.47；腹瀉率與相對(duì)豐度呈顯著負(fù)相關(guān)(P<0.05)，相關(guān)系數(shù)為-0.38~-0.53；粗蛋白質(zhì)表觀消化率與相對(duì)豐度呈顯著負(fù)相關(guān)(P<0.05)，相關(guān)系數(shù)為-0.39~-0.45，與罕見小球菌屬，未分類梭菌目，未分類丁酸球菌科等10個(gè)菌屬相對(duì)豐度呈顯著正相關(guān)(P<0.05)，相關(guān)系數(shù)為0.38~0.68；丁酸含量與和UCG-005相對(duì)豐度呈顯著正相關(guān)(P<0.05)，相關(guān)系數(shù)為、未分類丁酸球菌科相對(duì)豐度呈顯著正相關(guān)(P<0.05)，相關(guān)系數(shù)為0.38~0.56｡ 

討論

3.1飼糧中添加不同餅粕源發(fā)酵飼料對(duì)斷奶仔豬生長(zhǎng)性能及腹瀉率的影響

前人研究表明，餅粕類飼料在經(jīng)過益生菌發(fā)酵后，其中的非淀粉多糖等損害動(dòng)物生長(zhǎng)性能的抗?fàn)I養(yǎng)因子水平顯著降低，酸溶蛋白，粗蛋白質(zhì)含量顯著提高，中性洗滌纖維，酸性洗滌纖維含量顯著降低，同時(shí)會(huì)改變底物中有機(jī)酸，多肽和糖類的含量。發(fā)酵飼料中的益生菌在進(jìn)入機(jī)體后,能夠有效地提高營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)表觀消化率，從而提高畜禽的生長(zhǎng)性能。有報(bào)道指出,與未發(fā)酵棉籽粕相比，發(fā)酵棉籽粕可以提高肉雞的生長(zhǎng)性能和屠宰性能；與未發(fā)酵的菜籽粕相比，發(fā)酵菜籽粕可以顯著提高肉仔雞的生長(zhǎng)性能。此外，將斷奶仔豬飼糧中5%蛋白質(zhì)來源替換為大豆，酪蛋白和玉米酒精糟，結(jié)果表明不同來源的蛋白質(zhì)對(duì)動(dòng)物機(jī)體的影響不同。另有研究表明,益生菌發(fā)酵飼料之所以能夠改善生產(chǎn)性能是由于在發(fā)酵過程中益生菌提高了飼料利用效率,而不是增加了動(dòng)物的采食量。在本研究中，添加不同餅粕源發(fā)酵飼料后，斷奶仔豬的生長(zhǎng)性能有增加的趨勢(shì)，說明不同餅粕源發(fā)酵飼料可以在一定程度上改善仔豬的生長(zhǎng)性能｡

斷奶仔豬的胃腸功能沒有發(fā)育健全，斷奶后易產(chǎn)生應(yīng)激性腹瀉，而腹瀉是反映斷奶仔豬腸道狀態(tài)最直觀的表現(xiàn)。有研究表明,發(fā)酵棉籽粕，發(fā)酵中草藥渣和發(fā)酵大豆均可以顯著降低斷奶仔豬的腹瀉率，由此可見發(fā)酵飼料可以有效地緩解斷奶應(yīng)激導(dǎo)致的腹瀉，這與本試驗(yàn)的研究結(jié)果一致。益生菌及其代謝產(chǎn)物有利于腸道有益菌的繁殖，同時(shí)，益生菌可以影響腸道上皮細(xì)胞的更新，增加緊密連接蛋白和黏蛋白的產(chǎn)生，調(diào)節(jié)腸道抗菌肽的釋放，與致病菌爭(zhēng)奪營(yíng)養(yǎng)和生存空間，并與宿主和腸道共生菌群相互作用，恢復(fù)腸道屏障，從而達(dá)到減緩斷奶仔豬腹瀉的目的。前期研究表明，熱帶假絲酵母和釀酒酵母可以很好地發(fā)揮益生菌的作用。因此，在本試驗(yàn)中不同餅粕源發(fā)酵飼料組的腹瀉率較對(duì)照組均有所改善，但只有F組的腹瀉率降低達(dá)到了顯著水平。這可能與不同餅粕源發(fā)酵飼料中富含膳食纖維有關(guān)。研究表明，發(fā)酵棉籽粕的膳食纖維可以提高黃羽肉雞的絨毛長(zhǎng)度和隱窩深度，同時(shí)，研究發(fā)現(xiàn)，不同來源的膳食纖維對(duì)斷奶仔豬的腸道屏障功能影響不同｡

3.2 飼糧中添加不同餅粕源發(fā)酵飼料對(duì)斷奶仔豬營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)表觀消化率的影響

營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)表觀消化率是反映機(jī)體吸收的重要指標(biāo)。大量的研究證明，發(fā)酵飼料較未發(fā)酵飼料可以促進(jìn)機(jī)體的營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)表觀消化率。但在本試驗(yàn)中，M組，K組的營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)表觀消化率較C組沒有顯著差異變化，且中性洗滌纖維表觀消化率有降低趨勢(shì)。餅粕類飼料中粗纖維含量較高,即使經(jīng)過益生菌發(fā)酵依然會(huì)影響營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)表觀消化率。發(fā)現(xiàn)在飼糧中添加3%，6%，9%的發(fā)酵構(gòu)樹飼料顯著降低了粗蛋白質(zhì)表觀消化率，其原因可能為這些餅粕類飼料中殘留的抗?fàn)I養(yǎng)物質(zhì)與益生菌對(duì)營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)表觀消化率的增益作用相抵消導(dǎo)致的。H組的粗蛋白質(zhì)表觀消化率顯著提高，這可能是因?yàn)榧t花籽粕中含有抗氧化物質(zhì)，抑制了腸道中的炎癥反應(yīng)，從而提升了營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)表觀消化率。不同來源的蛋白質(zhì)對(duì)于動(dòng)物消化酶和膽汁分泌影響不同，研究發(fā)現(xiàn)，在生長(zhǎng)豬飼糧中由于纖維組成和理化性質(zhì)的差異，導(dǎo)致其營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)表觀全腸道消化率和能量利用效率存在很大差異，與本試驗(yàn)結(jié)果相同。

3.3飼糧中添加不同餅粕源發(fā)酵飼料對(duì)斷奶仔豬血清生化指標(biāo)的影響

血清生化指標(biāo)可以反映出機(jī)體對(duì)營(yíng)養(yǎng)的代謝情況。血清TP含量與蛋白質(zhì)在機(jī)體內(nèi)消化，吸收，代謝有直接的關(guān)系。TP由ALB和GLB組成，ALB由肝臟合成，是運(yùn)輸合成原料和代謝廢物的載體；GLB與機(jī)體免疫力相關(guān)。UN是蛋白質(zhì)分解的最終產(chǎn)物，代表著蛋白質(zhì)代謝與氨基酸的平衡，其含量越低,說明氨基酸合成能力越高。TP、ALB、GLB和UN共同反映著機(jī)體蛋白質(zhì)的代謝。在本試驗(yàn)中，F(xiàn)組的血清TP含量有升高趨勢(shì)，血清UN含量有降低趨勢(shì)，這與營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)表觀消化率結(jié)果相互印證，說明F組可以提高斷奶仔豬對(duì)飼糧蛋白質(zhì)的吸收和代謝，具有促生長(zhǎng)的作用。血清TC、TG、HDL和LDL是機(jī)體內(nèi)脂質(zhì)代謝的標(biāo)志物。其中TC的主要作用為形成膽汁、構(gòu)成細(xì)胞膜和合成激素參與到各種物質(zhì)代謝中；TG反映著脂肪組織合成情況;HDL和LDL是膽固醇在血液中的載體,HDL可以將血清中的膽固醇運(yùn)送到肝臟中合成其他物質(zhì),俗稱“血液清道夫”,LDL主要是把肝臟中的膽固醇運(yùn)送到全身各處｡在肉雞飼糧中添加6%發(fā)酵葡萄籽粕發(fā)現(xiàn),處理前后血清TC和TG含量雖沒有顯著差異,但有下降趨勢(shì);王荷香等研究發(fā)現(xiàn),在斷奶仔豬飼糧中添加發(fā)酵菜籽粕對(duì)于斷奶仔豬的血清TC､TG含量沒有顯著影響,但有下降趨勢(shì),這與本試驗(yàn)結(jié)果相同,其中以F組下降趨勢(shì)最為明顯｡也有研究表明在畜禽飼糧中添加益生菌發(fā)酵飼料可以顯著影響機(jī)體的脂質(zhì)代謝,如研究發(fā)現(xiàn),發(fā)酵棉籽粕可以影響黃羽肉雞脂質(zhì)代謝,進(jìn)而減少腹部脂肪沉積,但在本試驗(yàn)結(jié)果中并沒有達(dá)到顯著水平,其原因?yàn)槭艿桨l(fā)酵菌種､發(fā)酵底物的影響｡綜上所述,飼糧中添加不同餅粕源發(fā)酵飼料對(duì)斷奶仔豬血清生化指標(biāo)無不良影響,并可以在一定程度上提高蛋白質(zhì)和脂質(zhì)的利用率｡

3.4飼糧中添加不同餅粕源發(fā)酵飼料對(duì)斷奶仔豬腸道菌群的影響

在腸道中寄生著各種各樣的細(xì)菌，這些細(xì)菌分為有益菌、中間菌和有害菌，當(dāng)腸道環(huán)境健康時(shí)這3類細(xì)菌處于動(dòng)態(tài)平衡狀態(tài)，斷奶會(huì)破壞仔豬腸道菌群平衡。在飼糧中添加發(fā)酵飼料可以改善畜禽的腸道菌群，從而改善其健康狀態(tài)和生長(zhǎng)性能。大量研究表明，在動(dòng)物飼糧中添加發(fā)酵飼料可以提高腸道菌群的多樣性，比如，研究了發(fā)酵飼料對(duì)仔豬糞便菌群的影響，與本試驗(yàn)結(jié)果相同，發(fā)酵飼料組的α多樣性和β多樣性均得到了改善｡在仔豬腸道中Firmicutes和變形菌門(Proteobacteria)是最優(yōu)勢(shì)的菌門，F(xiàn)irmicutes可以通過合成β-半乳糖苷酶參與乳糖消化，而Proteobacteria可以編碼糖苷水解酶和多糖裂解酶參與到多糖的降解中。在本研究中，通過飼喂不同餅粕源發(fā)酵飼料增加了Blautia和Terrisporobacter的豐富度,而相關(guān)性分析顯示Blautia和Terrisporobacter與丁酸代謝呈正相關(guān),這也是糞便中丁酸含量的增加的原因｡有研究表明，Lactobacillus作為一種益生菌，可以降低腸道的pH，進(jìn)而抑制大腸桿菌､葡萄球菌等有害菌的增殖，而梭狀芽胞桿菌､Terrisporobacter則常被認(rèn)為是一種潛在的病原體｡有研究發(fā)現(xiàn),蒙花苷可以逆轉(zhuǎn)葡聚糖硫酸鈉(DSS)損傷的腸道菌群,其中就包括,而在本試驗(yàn)中,norank_f_norank_o_Clostridia_UCG-014相對(duì)豐度與ADG呈正相關(guān),且各試驗(yàn)組其相對(duì)豐度均有增加｡而Faecalibacterium和Prevotella被認(rèn)為可以抵抗腸道炎癥而減少腹瀉｡結(jié)合本試驗(yàn)結(jié)果,在飼糧中添加不同餅粕源發(fā)酵飼料可以改善斷奶仔豬的腸道菌群,進(jìn)而調(diào)控?cái)嗄套胸i的健康狀態(tài)和生長(zhǎng)性能,其主要表現(xiàn)在降低了斷奶仔豬的腹瀉率｡

3.5飼糧中添加不同餅粕源發(fā)酵飼料對(duì)斷奶仔豬糞便中揮發(fā)性脂肪酸含量的影響

揮發(fā)性脂肪酸是腸道微生物的代謝產(chǎn)物，同時(shí)也是蛋白質(zhì)等在腸道的最終產(chǎn)物｡許多研究表明，單胃動(dòng)物飼喂微生物發(fā)酵的飼料后，由于其腸道微生物的組成的改變，揮發(fā)性脂肪酸含量也會(huì)隨之改變。揮發(fā)性脂肪酸作為橋梁將腸道菌群和宿主之間緊密的聯(lián)系在了一起。研究發(fā)現(xiàn)，飼糧纖維能增加產(chǎn)丁酸菌的豐富度從而改善斷奶仔豬的生長(zhǎng)性能。丁酸具有提高生長(zhǎng)性能，降低腹瀉率的作用；同時(shí)也是腸道細(xì)胞的代謝能量來源，具有維持宿主黏膜屏障完整性的作用，研究表明，丁酸鈉具有通過改變腸道菌群結(jié)構(gòu)進(jìn)而改善斷奶仔豬生長(zhǎng)性能和增強(qiáng)腸道黏膜屏障功能的功能；研究發(fā)現(xiàn)，添加丁酸鈉可以顯著降低斷奶仔豬的腹瀉率。在本試驗(yàn)中，F(xiàn)組中復(fù)合餅粕源發(fā)酵飼料具有多種來源的膳食纖維，刺激了腸道蠕動(dòng)，提高了腸道中的發(fā)酵效率，促進(jìn)了丁酸的產(chǎn)生及腸道菌群的增殖，進(jìn)而改善斷奶仔豬的生長(zhǎng)性能和腸道健康｡

結(jié)論

飼糧中添加6%不同餅粕源發(fā)酵飼料可以優(yōu)化斷奶仔豬腸道菌群的結(jié)構(gòu),并在一定程度上改善生長(zhǎng)性能､降低腹瀉率､提高營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)表觀消化率,其中添加復(fù)合發(fā)酵餅粕的效果最好｡