乳酸菌發酵飼料對蛋雞的研究表明可提高蛋雞抗氧化能力和免疫功能
引言
在畜牧業、水產養殖業長期大量不合理使用抗菌藥物，會導致藥物殘留、細菌耐藥性等問題，嚴重影響畜牧、水產品的安全質量。此外，抗生素可通過生物富集或水體等途徑進人人體，影響人類的健康安全。我國從2015年提出停止使用洛美沙星、培氟沙星、氧氟沙星、諾氟沙星等四種喹諾酮類抗菌藥物到2020年飼料中全面禁抗，如何保障畜禽腸道健康成為業內關注的焦點問題，人們不斷探索酸化劑、益生元、益生菌、植物提取物以及中草藥替代抗菌藥物的可行性。乳酸菌是廣泛存在于動物腸道中具有重要生理功能的菌群，給動物飼喂乳酸菌制劑，能夠調節腸道菌群平衡，改善腸道健康，提高機體免疫力，發揮抗菌作用，提高飼料利用率和動物生產性能。發現，給肉雞的飲水中加人植物乳桿菌可顯著提高肉雞血液IgG和新城疫免疫抗體水平。研究表明，給肉雞的飲水中加人植物乳桿菌可顯著提高肉雞血液IgA水平。研究表明，在飼料中添加植物乳桿菌可提高肉雞血液IgA、IgG、IFN-y、IL-2和IL-6水平。給雛雞灌服植物乳桿菌液可顯著提高雛雞血液中新城疫免疫抗體效價。體外細胞試驗證明，植物乳桿菌和嗜酸乳桿菌具有較強的清除自由基的能力，且植物乳桿菌優于嗜酸乳桿菌。通過體外試驗發現，植物乳桿菌IBM1具有較強的抗氧化能力。植物乳桿菌代謝產物能顯著提高肉仔雞血清中SOD和GSH-Px的活性。前期研究發現，植物乳桿菌和嗜酸乳桿菌發酵飼料以15%比例替換蛋雞配合飼料，可顯著提高蛋雞的產蛋率，降低料蛋比，提高經濟效益，但其作用機制尚不明確。本試驗旨在研究植物乳桿菌和嗜酸乳桿菌發酵飼料對蛋雞血液抗氧化指標及疫苗免疫抗體水平以、主要臟器指數的影響，為乳酸菌發酵飼料在蛋雞生產中應用提供理論依據。
材料與方法
1.1試驗材料
1.1.1乳酸菌發酵原液
乳酸菌發酵原液，主要由植物乳桿菌、嗜酸乳桿菌等乳酸菌混合培養而成，有效微生物20億/mL，陰涼避光處保存，保質期12個月。
1.1.2試劑盒
禽流感H9N1抗體(AIV-H9N 1Ab)檢測試劑盒、雞新城疫抗體(NDV Ah)檢測試劑盒購自上海勁馬科技生物有限公司；超氧化物歧化酶（SOD）測試盒(WST-1法)、丙二醛(MDA )測定試劑盒(TBA法)、谷胱甘肽過氧化物酶( GSH-Px )、總抗氧化能力(T-AOC)測試盒購自南京建成生物工程研究所。
1.1.3儀器設備
MK3酶標儀；UV-2600i紫外可見光分光光度計。
1.2試驗動物與處理
選取288只37周齡健康的海蘭蛋雞，隨機分為4組，每組設6個重復，每重復12羽蛋雞。第1組為對照組，飼喂基礎日糧(表1)；第2、3、4組為試驗組，分別飼喂含5%乳酸菌發酵飼料+95%基礎日糧、10%乳酸菌發酵飼料+90%基礎日糧和15%乳酸菌發酵飼料+85%基礎日糧的混合日糧。預試期7天，試驗期60天。
注:復合預混料為每千克日糧提供銅8.00mg，鐵60.00mg，錳60.60mg，鋅80.00mg，硒030 mg，碘0.48mg，維生索A8000IU，維生索D32000IU，維生索E40，維生索K33.45 mg，維生索B10.8mg，維生索B23.7Smg，泛酸5.40mg，煙酸20.00mg，葉酸0.45mg，生物索0.10mg。
1.3飼養管理
試驗雞自由采食和飲水。每天光照16小時，采用人工光照和自然光照相結合。采用蛋雞常規飼養管理和常規免疫。
1.4乳酸菌發酵飼料的制作
將基礎日糧與乳酸菌發酵液按照一定比例混合均勻，壓實，裝人發酵袋內、密封，在環境溫度為20℃的條件下厭氧發酵15天。開袋后有乳酸香味即可使用。
1.5檢測指標與方法
1.5.1血液抗氧化指標及免疫抗體檢測試驗至30、60天，每重復隨機抽取1只雞，每組6只雞，翅靜脈采血5mL，肝素抗凝，3000r/min離心10min后收集血漿，分裝，-20℃冷凍保存，備用。
用酶聯免疫吸附法測定蛋雞血漿AIV-H9N1Ab、NDVAb。比色法測定血漿SOD活性、MDA、GSH-Px、T-AOC含量。
1.5.2臟器指數的測定
試驗至60天，每重復隨機抽取1只雞，每組6只雞，然后將雞宰殺取其肝臟、心臟、脾臟，分別稱重，計算臟器指數。
臟器指數=臟器重(g)/體重(kg)。
1.5.3腸壁厚度測定試驗至60天，每重復隨機抽取1只雞，分別從U字型十二直腸的底部和空腸中央部截取相同長度的十二直腸和空腸，分別用游標卡尺測量其厚度。
1.6數據處理與統計分析
試驗數據采用SAS9.20軟件進行單因素方差分析，用Duncan氏法進行多重比較。試驗結果用“平均值士標準差”表示。
結果
2.1乳酸菌發酵飼料對蛋雞血槳抗氧化能力的影響
試驗至30天，第4組蛋雞血漿T-AOC顯著高于對照組，SOD活性極顯著高于對照組及第2組(P<0.01)；MDA的含量極顯著低于對照組(P<0.01)。第3、4組GSH-Px含量顯著高于對照組(P<0.01)。
試驗至60天，第4組蛋雞血漿T-AOC顯著高于對照組和第2組(P<0.05)，第4組蛋雞血漿SOD活性極顯著高于對照(P<0.01)，第2、3組蛋雞血漿SOD活性顯著高于對照組(P<0.05)，試驗組蛋雞血漿MDA的含量極顯著低于對照組(P<0.01)，第4組顯著低于第2組(P<0.05)。第3、4組GSH-Px含量顯著高于對照組(P<0.05)(表2)。
差異極顯著(P<0.01)；下同。
2.2乳酸菌發酵飼料對蛋雞血槳AIV-H9N1及NDV杭體水平的影響
試驗至30天，第2、4組蛋雞血漿AIV-H9N 1抗體水平極顯著高于對照組及第3組(P<0.01)；試驗至60d，第2、3組蛋雞血漿AIV-H9N1抗體水平極顯著高于對照組(P<0.01)。
試驗至30天，第2~4組蛋雞血漿NDV抗體水平極顯著高于對照組，第4組極顯著高于第2、3組(P<0.01)；試驗至60天，第2、3組蛋雞血漿NDV抗體水平極顯著高于對照組(P<0.01)，第4組顯著高于對照組(P<0.05)(表3)。
2.3乳酸菌發酵飼料對蛋雞臟器指數的影響
由表4可見，第2、4組蛋雞的心臟指數顯著高于對照組及第3組(P<0.05)；試驗組的肝臟指數顯著高于對照組(P<0.05)；第4組的脾臟指數顯著高于對照組及第2組(P<0.05)。
2.4乳酸菌發酵飼料對蛋雞十二指腸和空腸厚度的影響
試驗至60天，第2~4組蛋雞十二指腸彎曲部厚度和空腸中央部厚度與對照組差異不顯著，(P>0.05)(表5)。
討論
3.1乳酸菌發酵飼料對蛋雞杭氧化能力的影響
體外或動物試驗也已證明，植物乳桿菌和嗜酸乳桿菌具有清除活性氧的作用。等體外細胞試驗發現，植物乳桿菌和嗜酸乳桿菌具有較強的清除自由基的能力，且植物乳桿菌優于嗜酸乳桿菌。體外試驗證明，從傳統發酵飲料中分離的植物乳桿菌DMs清除自由基的作用更強。體外試驗證明，嗜酸乳桿菌清除能力相對較強。通過體外試驗發現，植物乳桿菌KM1具有較強的抗氧化能力。研究認為植物乳桿菌KM1通過改變磷酸苷油激酶。α-甘油磷酸氧化酶、丙酮酸氧化酶和NADH過氧化物酶的表達水平來緩解氧化應激。植物乳桿菌JLAU103中分離、純化一種酸性胞外多糖(EPS )，體外試驗發現其對自由基具有較強的清除能力。體外試驗發現，植物乳桿菌KLDS 1.0386具有清除經自由基和脂質抗氧化能力。植物乳桿菌KLDS 1.0386顯著降低了LPS對小鼠肝組織損傷、TNF-α和IL-6水平以及髓過氧化物酶(MPO)活性。報道，植物乳桿菌代謝產物能顯著提高肉仔雞血清中SOD和GSH-Px活性。本試驗結果表明，給蛋雞飼喂含5%、10%和15%植物乳桿菌和嗜酸乳桿菌發酵飼料的混合日糧，可顯著提高蛋雞血漿SOD、GSH-Px和T-AOC活性，顯著降低血漿MDA含量，反映了飼喂植物乳桿菌和嗜酸乳桿菌發酵飼料能提高機體清除自由基的能力和降低脂肪氧化損傷，對細胞和組織具有顯著的保護作用。可見，利用植物乳桿菌和嗜酸乳桿菌發酵飼料飼喂蛋雞是十分有益的。
3.2乳酸菌發酵飼料對蛋雞禽流感和新城疫免疫杭體水平的影響
將植物乳桿菌或嗜酸乳桿菌添加飲水或飼料中，可提高家禽的免疫功能。報道，給肉雞的飲水中加人植物乳桿菌可顯著提高肉雞血液IgG和新城疫免疫抗體水平。報道，給肉雞的飲水中加人植物乳桿菌可顯著提高肉雞血液IgA水平。在飼料中添加植物乳桿菌，提高了肉雞血液IgA、IgG、IFN-y、IL -2和IL-6水平。給雛雞灌服植物乳桿菌液，可顯著提高雛雞血液中新城疫免疫抗體效價。用嗜酸乳桿菌培養液給雛雞飲水，顯著提高了血清IgG和新城疫疫苗免疫抗體水平。給肉雞飼喂添加植物乳桿菌L-137的飼料，顯著提高了肉雞脾臟IL-12β、IFN-β和IFN-y的基因表達水平。本試驗結果表明，在蛋雞日糧中飼喂乳酸菌發酵飼料均能提高禽流感H9N1抗體水平，試驗至30天，第2、4組極顯著高于對照組，試驗至60天，試驗組極顯著或顯著高于對照組。在整個試驗期內試驗組新城疫抗體水平極顯著或極顯著高于對照組。可見，給蛋雞飼喂植物乳桿菌和嗜酸乳桿菌發酵飼料可提高蛋雞疫苗免疫抗體水平，提高蛋雞的抗病力，值得推廣應用。
3.3乳酸菌發酵飼料對蛋雞臟器指數的影響
本試驗結果表明，用乳酸菌發酵飼料替換基礎日糧，試驗雞脾臟指數呈現逐漸增高的趨勢，15%乳酸菌發酵飼料+85%基礎日糧組蛋雞的脾臟指數顯著高于對照組。在肉雞飼料中添加植物乳桿菌，可顯著提高脾臟指數。給肉雞飲用植物乳桿菌菌液，脾臟指數也呈現明顯的增加趨勢。研究了副干酪乳桿菌KL1和植物乳桿菌亞種的作用，發現與自痢沙門氏菌感染組相比，益生菌治療組和益生菌預防組農大3號矮種雞的脾臟指數顯著增加。在雞飲水中添加0.3%的乳酸菌微生態制劑，與對照組雞比較，脾臟指數提高了67.14%。在基礎日糧中分別添加1.0%、2.0%的乳酸凍干菌菌粉，肉雞脾臟指數顯著高于對照組。顯然，以植物乳桿菌為代表的乳酸菌具有提高脾臟體重比的作用，與其增強動物免疫功能的作用是一致的。本試驗發現，飼喂乳酸菌發酵飼料，提高了蛋雞禽流感和新城疫疫苗免疫抗體水平，與脾臟指數提高有明顯的一致性。其原因可能是免疫器官發育是機體免疫功能的組織學基礎。但是，乳酸菌對免疫器官發育的影響受乳酸菌種類和攝人量的影響。試驗發現，三株乳酸菌培養物均能顯著提高肉雞脾臟指數，其中兩株乳酸菌培養物顯著提高胸腺指數，一株乳酸菌培養物顯著提高法氏囊指數。報道，在飼料中添加1.0 x 108 CFU/g約氏乳桿菌，對育成期蛋雞脾臟指數沒有顯著的影響。本試驗發現，飼喂5%乳酸菌發酵飼料+95%基礎日糧組、10%乳酸菌發酵飼料+90%基礎日糧組，蛋雞脾臟指數與對照組沒有顯著差異。可見，菌種、劑量選擇是至關重要的。
本試驗發現，用5%~15%乳酸菌發酵飼料替換基礎日糧，蛋雞肝臟指數顯著低于基礎日糧組，與已有報道不一致。在飼料中添加植物乳桿菌，對肉雞肝臟指數沒有顯著影響。報道，在育成期蛋雞飼料中添加1.0x108 CFU/g約氏乳桿菌，對肝臟指數沒有顯著的影響。可能與本試驗用乳酸菌發酵飼料替換基礎日糧，導致試驗組飼料能量水平低于對照組有關。也可能與植物乳桿菌或嗜酸乳桿菌及其代謝產物影響了肝臟脂肪代謝有關。給大鼠灌胃1.05x109、2.10x109、4.20x109 cfu/(kg·d)的乳酸菌懸液，其肝臟TG顯著低于肥胖組大鼠(陽性對照)，高劑量組大鼠的肝體比顯著降低。關于乳酸菌影響動物脂肪代謝的菌株篩選、有效劑量、作用機制有待進一步研究。
結論
蛋雞飼糧中添加植物乳桿菌和嗜酸乳桿菌發酵飼料，可提高蛋雞抗氧化能力和免疫功能，以添加15%最佳。
本產品所用的EM復合有益微生物菌種是經過提純復壯高濃度菌種，配以針對性的復合菌種專業培養基，能夠生產出高濃度約50公斤的EM活菌原液，每公斤成本幾毛錢。
【原料組成】酵母菌、芽孢桿菌、乳酸菌等，葡萄糖與載體等。
【產品成分分析保證值】酵母菌、芽孢桿菌、乳酸菌復合益生菌合計≥200億cfu/g，水分＜9.0%。凈含量200g/包。
EM菌是一種多功能的復合益生菌，目前幾乎在世界上的所有國家進行推廣使用，可廣泛應用于水產畜牧業、環保、種植業等領域。主要作用簡單介紹如下：
視頻——神奇的EM技術
1.在種植上制作生物防蟲液,防治蟲害還能促長，減少種植蔬果的細菌與真菌病害；
2.生物菌肥制作，生產自然的有機果蔬產品；
3.改善環境衛生，下水道、臭水池、垃圾發酵、廁所除臭等環保領域使用量大。除異臭臭味，凈水質，清潔空氣，改善環境；
4.提高魚蝦禽畜的健康水平，凈化水質控制有害病菌，節省藥物開支；
5.養殖上能夠降低料耗提高肉料比，節省飼料降低養殖成本；
6.發酵分解飼料中的有機物，提供適口性與提高高效代謝營養組分；
7.排毒清腸，提高肉、蛋、奶等產品品質，提升經濟效益；
8.發酵飼料，各種飼料、農產品加工下腳料、食品加工糟渣通過發酵后變成優質飼料降低飼料成本。
【操作方法】
在非金屬容器中將本產品1包與1公斤紅糖一起溶入50公斤約35℃的溫水中后密封放在室溫25℃以上的環境下進行培養，僅需24-48小時即可完成培養（PH值在3.5左右），常溫下3個月內每毫升含復合益生菌在100-300億，時間越長菌種數量會隨之下降。密封可以保存一年以上，但3個月內使用效果更好。
【使用方法】
生產完成的EM活菌使用方法、效果與大部分市場上銷售的EM菌類產品基本上無明顯差異，但由于自制的EM菌液成本低、活性高，不需要再用紅糖激活等即可直接使用，方便且成本低，因此可以適當提高使用量能夠達到更好的效果。
1.動物飲水或拌料：按照每噸飲水或飼料中添加1公斤以上的使用量添加，最高使用量不超過5公斤。
2.魚塘潑灑：每畝使用約5公斤（選擇不下雨的晴天使用，使用后注意增氧）；小水體養殖龜鱉、蛙類等水產動物，根據情況每2-7天潑灑一次，每100平方米面積使用0.5-1公斤。
3.制作發酵飼料或青貯飼料：根據不同物料每噸使用5-10公斤，制作時添加10%的玉米粉或其它能量飼料一起發酵效果更好（制作青貯飼料不需要添加）。
4.環境除臭、下水道異味、養殖場（欄舍內與糞污堆放處）、糞水池、廁所等，稀釋30倍噴灑，噴灑到動物身體上、人體上無害。
5.制作有機肥：每噸堆肥中運用5公斤以上，水肥制作每噸添加2公斤以上。
6.澆灌農作物時每噸水中添加1公斤能夠促進植物的健康水平；噴灑植物葉面每100公斤水中添加2公斤能夠促進作物的光合作用和健康水平（可以與葉面肥一起使用）。
廣西助農畜牧科技有限公司有7個專業現代生態養殖技術實戰型團隊，為全國養殖場進行非洲豬瘟防控技術、現代循環生態養殖場的規劃、設計、建設、整改等服務；養殖場環保問題低成本解決方案（養殖場惡臭、氨氣，蒼蠅、污水、糞污資源化、病死動物無害化處理）與專業配套產品。幫助政府部門完成現代生態養殖、糞污資源化、病死動物無害化處理、糧改飼、秸稈綜合利用、牧草產業等達標工作、培訓工作（免費且有專業資料等），針對您當地制定專業方案，做出示范樣板后確定效果再進行推廣。
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