從表1看出沙棘皮渣、籽渣成分含量有一定差異，但總體差異并不顯著，一般的生產廠家皮渣、籽渣同時產生，故本實驗采用上述2種的等量混合皮渣。

1.1.3 培養(yǎng)基

1.1.3.1 試管培養(yǎng)基

地衣芽孢桿菌，編號Y-03。LB培養(yǎng)基：蛋白胨10g、酵母膏5g、NaCl10g、蒸餾水1000ml、瓊脂粉15g，pH值為7.0。

產朊假絲酵母，編號B-05。麥芽汁培養(yǎng)基。

白地霉，編號S-01。麥芽汁培養(yǎng)基。

1.1.3.2 液體發(fā)酵培養(yǎng)基

地衣芽孢桿菌LB培養(yǎng)基（g/l）：蛋白胨10g、酵母膏5g、氯化鈉10g，pH值為7.0。

產朊假絲酵母YPD培養(yǎng)基（g/l）：蛋白胨20g、酵母浸膏10g、葡萄糖20g，pH值為6.5。

白地霉YPD培養(yǎng)基（g/l）：蛋白胨20g、酵母浸膏10g、葡萄糖20g，pH值為6.5。

1.1.4 主要設備

SPH-2102恒溫培養(yǎng)搖床、PHS-3C型酸度計、SPX-450型恒溫培養(yǎng)箱、OLMPUS CX41顯微鏡、KDN-08A定氮儀。

1.2 方法

1.2.1 菌種培養(yǎng)方法

1.2.1.1 地衣芽孢桿菌

斜面菌種：35℃培養(yǎng)24h。

液體菌種：裝液量為100ml∕500ml，35℃，160r/min搖床培養(yǎng)36h。

1.2.1.2 產朊假絲酵母

斜面菌種：30℃培養(yǎng)48h。

液體菌種：裝液量為100ml∕500ml，30℃，160r/min搖床培養(yǎng)24h。

1.2.1.3 白地霉

斜面菌種：30℃培養(yǎng)48h。

液體菌種：裝液量為100ml∕500ml，30℃，200r/min搖床培養(yǎng)48h。

1.2.2 沙棘皮渣固體發(fā)酵培養(yǎng)方法

將培養(yǎng)好的液體菌種按一定接種量接入配好的固體物料中，加入營養(yǎng)鹽，按一定水分含量拌勻，鋪于層架的屜層上，培養(yǎng)前期可上蓋滅菌的濕紗布，控制環(huán)境濕度80%左右，30℃恒溫恒濕固態(tài)培養(yǎng)，每天通風換氣2~3次，每次20~30min。

1.2.3 蛋雞飼喂實驗

1.2.3.1 實驗動物和日糧組成

實驗選擇60周齡海蘭褐蛋雞2880只，隨機分為6組，每組3個重復，1到5組在基礎日糧中分別添加1%、2%、3%、4%、5%沙棘發(fā)酵飼料，對照組飼喂玉米-豆粕型基礎日糧；預試期7d，正式飼喂期35d，實驗期共42d。基礎日糧參照中華人民共和國蛋雞飼養(yǎng)標準配制，其組成及營養(yǎng)水平見表2。

從表3結果可以看出，果渣配比超過70%時物料生長明顯變差，說明過高比例的沙棘果渣不利于菌體生長，配比低于40%時生長相對稍差一些，結合細胞數(shù)及粗蛋白2個項目指標，果渣配比占整個物料的40%~70%時最適宜，此時發(fā)酵料細胞數(shù)及粗蛋白均較高，細胞數(shù)最高可達44億個/g以上，粗蛋白含量可達39%以上。

2.2 菌種配比對發(fā)酵的影響

設計3個菌種的不同配比，總接種量按10%加入，進行培養(yǎng)情況觀察、培養(yǎng)物活菌細胞數(shù)及粗蛋白檢測，結果見表4。

從表4可以看出，菌種的不同配比及加入量對發(fā)酵料的細胞數(shù)及粗蛋白有較大的影響，3個菌種同時加入時，菌體生長最好，三個菌種同時在發(fā)酵料中生長，細胞數(shù)可達到最大42.61億個/g，粗蛋白可達38%以上。產朊假絲酵母和白地霉對原料無機氮的轉化及菌體蛋白的提高有較大的影響，可以促進無機氮轉化為有機氮，提高菌體蛋白含量。

2.3 培養(yǎng)基水分含量對發(fā)酵的影響

設計培養(yǎng)物不同的水分含量，進行培養(yǎng)情況觀察、培養(yǎng)物活菌細胞數(shù)及粗蛋白檢測，結果見表5。

從表5可以看出，培養(yǎng)料水分含量為50%~55%時菌體生長情況較好，最適水分含量為55%，此時菌體生長最好，發(fā)酵料細胞數(shù)及粗蛋白含量均較高。水分含量低于50%時菌體生長變差；高于60%時生長變慢，同時伴隨染雜菌現(xiàn)象。

2.4 培養(yǎng)料初始pH值的確定

設計初始pH值實驗配方，用1mol/l的HCl或1mol/l NaOH調節(jié)培養(yǎng)料的起始pH值，對培養(yǎng)料進行生長情況觀察、培養(yǎng)物活菌細胞數(shù)及粗蛋白檢測，結果見表6。從表6可知，原料起始pH值對培養(yǎng)的影響較大，最適pH值為4.5~5.0，三個菌種均能生長較好，菌體生長前期既能較快繁殖達到一定菌數(shù)，且后期菌體亦生長較好，pH值為5.0時細胞數(shù)及粗蛋白含量均較高。pH值較低時菌體生長較慢，細胞數(shù)較低，pH值過高菌體前期生長快，但后期易染雜菌，導致生長變差無法檢測。

2.5 接種量的確定

3個菌種按照同樣的比例加入，設計不同的接種總量，對培養(yǎng)料進行生長情況觀察及活菌細胞計數(shù)，結果見圖1。

從圖1可見，隨著接種量的增加，發(fā)酵料菌體生長速度隨之變快，當接種量達到6%時，達到最佳生長狀態(tài)，細胞數(shù)最高可達45億個/g以上，隨著接種量的增加，產品細胞數(shù)不再明顯增加，物料菌體生長達到穩(wěn)定狀態(tài)，由此可以確定接種量6%為最適接種量。

2.6 無機氮源轉化率實驗

酵母可將培養(yǎng)基中氨態(tài)氮的2/3轉化為蛋白質氮，具有較強的轉化無機氮源的能力，以滿足菌體生長發(fā)育的需要，提高菌體蛋白的含量。本實驗以尿素作為無機氮源，其添加量及實驗結果見表7。

從表7中可以看出，當尿素添加量為3%時，轉化率最高，達86.01%，同時純蛋白較高，達31.59%，確定尿素添加量為3%時最適宜。

2.7 培養(yǎng)周期的確定

從培養(yǎng)開始，每隔4h取樣一次，測定培養(yǎng)料不同時間的活菌細胞數(shù)，見圖2。

由圖2可見，隨著培養(yǎng)時間的延長，產品細胞數(shù)隨之增加，至44~48h左右時，細胞數(shù)相對穩(wěn)定，可達45億個/g左右，不再大幅增加，因此培養(yǎng)周期可確定為44~48h。

2.8 對蛋雞生長性能的影響

在蛋雞日糧中添加不同比例的發(fā)酵沙棘果渣進行飼喂實驗，分別統(tǒng)計日產蛋率、平均蛋重、蛋黃色澤、破損量、軟蛋量、料蛋比、只日采食量等，實驗結果見表8。