發酵飼料對蛋鴨產蛋性能、蛋品質、腸道消化酶活性及免疫功能的影響

2021-02-01 09:48:23 點擊：

摘要：本試驗旨在研究飼糧添加不同水平的發酵混合飼料和發酵酒糟對蛋鴨產蛋性能、蛋品質、腸道消化酶活性及免疫功能的影響。選用 35 周齡龍巖山麻鴨 750 只，隨機分為 5 組，每組 6 個重復，每個重復 25 只鴨。對照組飼喂基礎飼糧，試驗組分別在基礎飼糧中添加 2%、4% 的發酵混合飼料和 2%、4% 的發酵酒糟。試驗期 3 個月。結果表明：1、與對照組相比，飼糧添加 2% 和 4% 發酵酒糟顯著升高了蛋鴨的日產蛋重 (P ＜ 0.05) ，飼糧添加 4% 發酵酒糟顯著降低了蛋鴨的料蛋比 (P ＜ 0.05) ，飼糧添加 4% 發酵酒糟顯著升高了鴨蛋中蛋清重和蛋黃顏色 (P ＜ 0.05) ，飼糧添加 4% 發酵混合飼料和 4% 發酵酒糟顯著降低了蛋鴨肌胃和腺胃 pH(P ＜ 0.05)，飼糧添加 4% 發酵混合飼料顯著提高了蛋鴨空腸脂肪酶和糜蛋白酶活性 (P ＜ 0.05)，飼糧添加 2% 和 4% 發酵酒糟顯著提高了蛋鴨空腸糜蛋白酶和胰蛋白酶活性 (P ＜ 0.05)，飼糧添加 4% 發酵酒糟顯著升高了蛋鴨空腸黏蛋白；2、分泌型免疫球蛋白 A (SIgA) 的 m Ｒ NA 相對表達量以及 SIgA含量 (P ＜ 0.05) 。綜上所述，發酵酒糟對蛋鴨產蛋性能、蛋品質、腸道消化酶活性和免疫功能優于發酵混合飼料，且以 4% 的添加水平效果更好。

關鍵詞 : 發酵飼料；蛋鴨；產蛋性能；消化酶活性；腸道免疫

近年來，抗生素的藥物殘留問題及其危害日益突出，禁用抗生素已是大勢所趨。因此，研發飼用抗生素替代品成為動物營養領域的一個研究熱點。發酵飼料是利用益生菌對飼料進行發酵得到的一種新型微生物類飼料，其在生產過程中微生物發酵可以產生大量有益于動物健康的代謝產物，具有提高飼料利用率、改善腸道健康等特點。因此，發酵飼料可以在一定程度上減少養殖過程中飼用抗生素的使用，從而降低養殖成本。目前，關于蛋鴨養殖中使用發酵飼料的信息很有限，研究發酵飼料在蛋鴨飼糧中的合理應用技術對蛋鴨健康養殖具有重要意義。

近年來研究顯示，在家禽生產中使用發酵飼料可維持家禽消化道微生態平衡、增強機體免疫力、提高生長性能。崔衛濤等報道，飼糧添加 4% 發酵棕櫚粕可提高蛋雞產蛋性能、雞蛋哈氏單位和蛋黃色澤，改善蛋品質。Feng 等在飼糧中添加發酵豆粕顯著提高了 1 ～ 21 日齡肉仔雞小腸內容物中胰蛋白酶、脂肪酶和糜蛋白酶活性。蛋鴨養殖模式粗放，由病毒、細菌感染、惡劣飼養環境等導致的腸道性疾病非常普遍，造成蛋鴨產蛋性能和蛋品質下降，機體抗氧化和免疫機能低下。目前，有關發酵飼料在蛋鴨生產中的應用報道較少，不同底物來源發酵飼料對蛋鴨產蛋性能、蛋品質、腸道消化酶活性及免疫功能的影響未見報道。因此，本試驗擬采用復合益生菌對以玉米、豆粕、麩皮為底物和以酒糟為底物分別發酵制備發酵飼料，研究不同發酵飼料對產蛋高峰期蛋鴨產蛋性能、蛋品質、腸道消化酶活性及免疫功能的影響，旨在為發酵飼料在蛋鴨生產中合理應用提供參考依據。

1 材料與方法

1.1 試驗設計與飼養管理

試驗在廣東省農業科學院動物科學研究所原花都蛋鴨實驗基地進行，試驗選用 35 周齡的福建龍巖山麻母鴨 750 只，隨機分為 5 個組，每組 6 個重復，每個重復 25 只鴨。試驗鴨地面平養 ( 水域面積∶陸地面積為 1:3) 。蛋鴨產蛋率在 80% 以上時開始正式試驗，試驗期間自由采食和飲水，每日光照 16h，試驗期為 3 個月。

1.2 試驗飼糧

試驗采用玉米－豆粕型飼糧。實測玉米、小麥麩和豆粕的粗蛋白質含量，其余營養參數參照《中國飼料成分及營養價值表( 2017 年第 28 版 )》配制飼糧，試驗飼糧的營養水平參照本課題組研究結果確定，各組的營養水平保持一致，試驗飼糧組成及營養水平見表 1。對照組飼喂不含抗生素的基礎飼糧，試驗組分別在基礎飼糧中添加 2%、4% 的發酵混合飼料和 2%、4% 的發酵酒糟。本試驗所用的發酵飼料由新希望六和股份有限公司廣東新區提供。其中，發酵菌液由乳酸菌、枯草芽孢桿菌和酵母菌組成，活菌數分別為 1×107 、1×108 和 3×107 CFU/g。發酵混合飼料是以玉米、豆粕、麩皮為底物，按質量比 20:20:60 比例混合后，以 1000kg 底物接種 500kg 發酵菌液厭氧發酵 7d 制備而成，烘干后其水分含量為 10%，粗蛋白質含量為 13%，pH為 4.2；發酵酒糟是以酒糟為底物，以 1000kg 底物接種 500kg 發酵菌液厭氧發酵 7d 制備而成，烘干后其水分為 10%，粗粗蛋白質含量為 21%，pH 為 4.5。

1.3 樣品的采集與制備

試驗鴨飼養 3個月后，每重復選接近平均體重試驗鴨 2只，稱活體重后，試驗鴨頸部放血致死，剖開腹腔，取出內臟，分離出肌胃、腺胃、十二指腸、空腸和回腸，用于測定 pH ；另外，用手術刀分離 10cm 空腸中段，取空腸內容物。然后用預冷的磷酸鹽緩沖液 (PBS) 清洗后分成 2 段，一段空腸置于冰板上用載玻片快速刮取空腸黏膜，黏膜樣和空腸段分別裝入凍存管，于液氮速凍，-80℃保存備用。在產蛋高峰期每個月末，從每個重復欄選取 4 枚未破損蛋 ( 接近平均蛋重 )，共計 120 枚，做好標記，用于測定蛋品質指標。

1.4 檢測指標與方法

1.4.1 產蛋性能

試驗期間，所有欄試驗鴨每天的給料量都保持一致，每天準確記錄剩料量。以重復為單位，準確記錄試驗鴨每天的蛋重、產蛋數量、破蛋、畸形蛋數量和重量，統計產蛋率、平均蛋重、日產蛋重、料蛋比、破蛋率、畸形蛋率。

1.4.2 蛋成分和蛋品質

蛋殼厚度用數顯千分尺 ( MODEL-1061) 測定蛋殼鈍端、中部和銳端蛋殼厚度，取其平均值表示；蛋形指數采用游標卡尺 ( 滬制01120028) 量出其縱徑和橫徑后計算比值表示; 蛋殼強度、哈氏單位、蛋重和蛋黃顏色采用蛋殼強度儀 (EFR-01，以色列 ) 和全自動蛋品分析儀 (ORKA，北京天翔飛域儀器設備有限公司 ) 測定 ; 蛋黃重采用精密電子分析天平 (AL104) 測定 ; 蛋殼重為含有蛋殼膜的蛋殼在烘箱 105℃烘干冷卻后稱重 ; 蛋清重則通過蛋重減去蛋黃重和蛋殼重后計算得出。測定在鴨蛋采集后 48 h 內完成，最后取各批次的蛋品質指標的平均值表示。

1.4.3 胃腸道 pH

屠宰結束分離出胃腸組織后，立即用 pH90 型直插式 pH 計測定肌胃、腺胃、十二指腸、空腸和回腸內容物 pH，每個組織樣測定 3 次，取平均值。 1.4.4 空腸消化酶活性和分泌型免疫球蛋白 A(SIgA) 含量

分別取空腸內容物和空腸黏膜 0.3g，按質量比 1:9 加勻漿介質，勻漿，4℃下 4000r/min 離心 10min，取上清液，分別用南京建成生物工程研究所生產的試劑盒測定空腸內容物中淀粉酶、脂肪酶、胰蛋白酶、糜蛋白酶活性和 SIgA 含量。

1.4.5 腸道免疫相關基因 mRNA 相對表達量的測定

空腸總 RNA 的提取采用 TRIzol 試劑 (Invitro-gen，美國 ) 提取，提取的總 RNA 用 ND-1000 紫外分光光度計 (Thermo Fisher，美國 ) 在 OD260/OD280 下檢測 RNA 的濃度和純度。cDNA 的合成采用 cDNA 合成試劑盒 (TaKaRa，日本 ) 兩步法在實時熒光定量 PCR 儀 (CFX 96，BIO-RAD，美國 ) 進行。第 1 步基因組 DNA 去除反應，反應體系為 10μL，反應參數為 42℃ 2min；第 2 步反轉錄反應，反應體系為 20μL，反應參數為 37℃ 15 min， 85℃ 5s，4℃保存。反應結束后樣品轉移至 -80℃凍存待用。

實時熒光定量 PCR 反應程序 : 第 1 步預變性，95℃ 30 s；第 2 步 PCR 擴增，95℃ 5s、退火溫度 30s，40 個循環。所有引物依據 iTaqTM Universal SYBER Green (TaKaRa，日本 ) 試劑盒要求，參照 GenBank 上已發布序列，采用 Primer Premier 5.0 設計 ( 跨內含子 ) 或參考相關文獻，引物由上海生工生物工程公司廣州分公司合成，引物序列見表 2。

參照 Livak 等的方法用 2-ΔΔCT 法定量目標基因的相對表達量，以 β- 肌動蛋白 (β-actin) 作為內參基因進行校準。

1.5 統計分析

試驗數據采用 SAS V8.1 軟件進行單因素方差分析 ( one-way ANOVA) ，并采用 Duncan 氏法進行多重比較。結果用平均值與均值標準誤 (SEM) 表示，統計顯著性水平為P ＜ 0.05。 2 結果

2.1 發酵混合飼料和發酵酒糟對蛋鴨產蛋性能的影響

如表 3 所示，與對照組相比，飼糧添加 2% 和 4% 發酵酒糟顯著升高了蛋鴨的日產蛋重 (P ＜ 0.05) ，飼糧添加 4% 發酵酒糟顯著降低了料蛋比 (P ＜ 0.05) 。飼糧添加發酵混合飼料和發酵酒糟對蛋鴨產蛋率、平均蛋重、破蛋率以及畸形蛋率均無顯著影響 (P ＞ 0.05) 。

2.2 發酵混合飼料和發酵酒糟對蛋鴨蛋成分和蛋品質的影響

如表 4 所示，與對照組相比，飼糧添加 4% 發酵酒糟顯著升高了鴨蛋中蛋清重和蛋黃顏色 (P ＜ 0.05)。飼糧添加發酵混合飼料和發酵酒糟對蛋鴨蛋殼厚度、蛋殼強度、蛋形指數、蛋黃重、蛋殼重均無顯著影響 (P ＞ 0.05) 。

2.3 發酵混合飼料和發酵酒糟對蛋鴨胃腸道的影響

pH 和消化酶活性的影響如表 5 所示，與對照組相比，飼糧添加 4% 發酵混合飼料和 4% 發酵酒糟顯著降低了蛋鴨肌胃和腺胃 pH(P ＜ 0.05)。飼糧添加發酵混合飼料和發酵酒糟對蛋鴨十二指腸、空腸和回腸 pH 均無顯著影響 (P ＞ 0.05) 。

如表 6 所示，與對照組相比，飼糧添加 4% 發酵混合飼料顯著提高了蛋鴨空腸脂肪酶和糜蛋白酶活性 (P ＜ 0.05)，飼糧添加 2% 和 4% 發酵酒糟顯著提高了蛋鴨空腸糜蛋白酶、胰蛋白酶活性 (P ＜ 0.05) 。

2.4 發酵混合飼料和發酵酒糟對蛋鴨空腸免疫細胞因子 mRNA 相對表達量和 SIgA 含量的影響

如表 7 所示，與對照組相比，飼糧添加 4% 發酵酒糟顯著升高了蛋鴨空腸黏蛋白 2(MUC2) 、SIgA 的 mRNA 相對表達量以及 SIgA 含量 (P ＜ 0.05) 。飼糧添加發酵混合飼料和發酵酒糟對空腸白細胞介素 -1β(IL-1β)、白細胞介素 -6(IL-6) 、白細胞介素 -10(IL-10) 、干擾素 -α(IFN-α) 的 mRNA 相對表達量均無顯著影響 ( P ＞ 0.05) 。

3 討論

發酵混合飼料和發酵酒糟對蛋鴨產蛋性能的影響發酵飼料主要是以微生物為生物飼料發酵菌種，將飼料蛋白質轉化為微生物菌體蛋白、生物活性小肽、氨基酸、微生物活性益生菌為一體的生物發酵飼料。它可以產生大量有機酸、酶等代謝物，提高飼料中營養物質的消化利用率，降低抗營養因子，改善飼料品質 ; 同時增強機體免疫力和抵抗力。近年來，玉米、豆粕、菜籽粕、棉籽粕、酒糟等飼料資源發酵后飼用效果的研究報道不少，發酵飼料在配合飼料中添加比例一般為 2% ～ 50%。在生產性能方面，總體表現為產蛋率升高，料蛋比降低，每千克肉、蛋的飼糧成本降低，養殖經濟效益增加。崔衛濤等在蛋雞飼糧中飼喂添加 4% 發酵棕櫚粕可以提高日產蛋重，降低料蛋比。 Engberg 等以濕發酵飼料與水的混合比例按 1．0∶ ( 1.2～ 1.4) 飼喂蛋雞可改善蛋重和飼料轉化率，但對產蛋率和日產蛋重無顯著影響。Okrathok 等研究報道，蛋雞飼糧添加 24% 發酵木薯對蛋雞采食量、產蛋率和蛋重無負面影響。周建民等試驗表明，飼糧添加 0.9% ～ 1.2% 酒糟酵母培養物能通過提高肉仔雞血清抗氧化能力，改善空腸黏膜形態結構，從而改善生長性能。本試驗結果表明，飼糧發酵酒糟添加水平達到 4% 時可改善 35 周齡龍巖山麻鴨產蛋性能，明顯提高麻鴨的日產蛋重，降低料蛋比，這與其他相關研究報道基本一致。豆粕發酵可降低豆粕中的β伴大豆球蛋白、大豆球蛋白、植酸磷等抗營養因子。與玉米、豆粕和麩皮為底物的發酵混合飼料相比，以酒糟為底物的發酵酒糟富含蛋白質、氨基酸、核苷酸、B 族維生素、礦物質和微量元素等營養素及多肽、寡糖、有機酸、消化酶和未知生長因子等多種益生物質。其促生長作用可能與其發酵后降低粗纖維含量、提高飼糧適口性以及富含的各種營養素和益生成分的作用密不可分。蛋白質、氨基酸和維生素等營養物質可保障動物自身正常生長。小肽、寡糖、有機酸和消化酶等可改善腸道內環境，促進營養物質的消化吸收。同時，未知生長因子在促生長中可能存在協同與轉化作用。

3.2 發酵混合飼料和發酵酒糟對蛋鴨蛋品質的影響

本試驗中，飼糧添加 4%發酵酒糟顯著提高了蛋鴨蛋黃顏色，但對蛋形指數、蛋殼厚度、蛋殼強度等無顯著影響。有研究報道，發酵飼料中富含乳酸桿菌和雙歧桿菌，可以影響宿主代謝，特別是肝臟和腸道組織；它可以提高超氧化物歧化酶和谷胱甘肽過氧化物酶等抗氧化酶活性，降低機體氧化應激，從而提高畜禽產品品質。發酵酒糟富含氨基酸、維生素、輔酶以及微量元素等營養物質，具有抗氧化作用，能通過生理途徑進入禽蛋中，改善禽蛋品質。與發酵豆粕和發酵麩皮相比，發酵酒糟富含葉黃素，可調節禽蛋蛋黃顏色。王少琨等研究表明，飼糧添加2%～8% 發酵酒糟可提高 72 周齡海蘭褐蛋雞蛋黃顏色、蛋白高度和哈氏單位。吳俊鋒等研究顯示，飼糧添加 2.5% 發酵豆粕可提高蛋黃顏色。Lei 等研究報道，蛋雞在產蛋高峰期飼糧添加地衣芽孢桿菌顯著增加了蛋殼厚度、蛋殼強度、哈氏單位和蛋黃顏色。 Engberg 等研究報道，飼喂濕發酵飼料顯著提高了雞蛋蛋殼重和蛋殼強度。以上研究表明，飼糧添加適宜比例的發酵飼料可以改善禽蛋品質。以酒糟為底物的發酵酒糟在改善蛋黃顏色和哈氏單位方面優于以玉米、豆粕和麩皮為底物的發酵混合飼料。本試驗中，發酵混合飼料并未改善蛋黃顏色，可能與底物中玉米和豆粕含量較低有關

3.3 發酵混合飼料和發酵酒糟對蛋鴨胃腸道 pH 和消化酶活性的影響

畜禽消化道酸度是影響其消化環境的重要因素，也是調節胃腸道內環境酸堿平衡、電解質平衡的基礎，適宜的酸度是維持畜禽消化系統正常生理功能的關鍵。胃內 pH 降低，可使胃蛋白酶迅速活化，pH提高到 4時，活化速度緩慢；當 pH大于 6時，胃蛋白酶失活。本試驗發現，在蛋鴨飼糧中添加 4% 發酵混合飼料和 4% 發酵酒糟均可顯著降低肌胃和腺胃 pH，有利于胃蛋白酶分泌。動物消化利用營養物質主要通過消化道內消化酶的作用，其活性高低直接影響動物對飼糧的利用程度。淀粉酶、蛋白酶、脂肪酶是畜禽消化道內主要的 3 種消化酶。Feng 等在飼糧中添加發酵豆粕替代豆粕顯著提高了 1 ～ 21 日齡肉仔雞小腸內容物中胰蛋白酶、脂肪酶和糜蛋白酶活性，而且在 22 ～ 42 日齡階段蛋白酶活性進一步加強。Jin 等在肉仔雞飼糧中添加不同的乳酸菌制劑發現，乳酸菌顯著提高了 40 日齡肉仔雞小腸中淀粉酶活性。石琳等研究報道，飼糧添加酵母濃縮物有提高十二指腸內容物淀粉酶、蛋白酶和脂肪酶活性的趨勢。還有研究表明，益生菌可提高畜禽腸道消化酶活性。本試驗結果表明，飼糧添加4%發酵混合飼料顯著提高了蛋鴨空腸脂肪酶和糜蛋白酶活性，飼糧添加 2% 和 4% 發酵酒糟顯著提高了蛋鴨空腸糜蛋白酶、胰蛋白酶活性，與不同動物的研究結果基本一致。可能的原因為 : 酵母菌、乳酸菌和芽孢桿菌的代謝產物中含有消化酶，可以直接給蛋鴨補充的消化酶；也可能改善蛋鴨腸道微生物菌群結構，促進酵母菌、乳酸菌、芽孢桿菌等有益菌的繁殖，進而提高腸道內消化酶活性。

3.4 發酵混合飼料和發酵酒糟對蛋鴨腸道免疫功能的影響

腸黏膜免疫屏障系統主要由腸相關淋巴組織構成，包括黏膜固有層及上皮細胞層內淋巴細胞、孤立淋巴濾泡、腸系膜淋巴結、潘氏細胞等。腸道免疫系統受到刺激后，可以分泌免疫球蛋白、白細胞介素和干擾素等，通過免疫調節維持腸道上皮穩態。SIgA 是腸道外分泌物中的主要免疫球蛋白，亦是黏膜免疫系統中的優勢性抗體，它與非特異性免疫蛋白共同作用可阻止微生物黏附于上皮細胞，阻止損傷的相關炎癥反應，還可以中和微生物毒素和病原微生物，調控腸道共生菌群，維持不同腸段菌群特異性。MUC2 由腸道杯狀細胞分泌，是構成腸道黏液層的主要成分，發揮潤滑和拮抗致病菌的侵襲和黏附作用。細胞因子具有調節白細胞、介導炎癥反應、參與免疫應答和組織修復等生理功能。

關于發酵飼料對家禽腸道免疫功能的影響報道較少，大多數研究集中在腸道分泌型免疫球蛋白含量等表觀指標測定。Gao 等研究發現，科比肉仔雞飼糧中添加 0.25% ～ 0.50% 釀酒酵母發酵物可增加回腸上皮內淋巴細胞數量和盲腸扁桃體 SIgA 含量，降低球蟲感染。劉輝等在飼糧中添加副干酪乳桿菌發酵飼料能調節菌群平衡，增強機體免疫功能。有研究表明，飼料微生物發酵產生的短鏈脂肪酸，如丁酸可誘導杯狀細胞 MUC2 的分泌和 T 細胞的分化，同時可抑制核因子 -κB 表達，進而提高動物機體的免疫功能。發酵麩皮多糖具有免疫調節作用，可以刺激免疫細胞分泌細胞因子，具有一定的抗炎活性。本試驗中，飼糧添加 4% 發酵酒糟可提高蛋鴨空腸中 MUC2、SIgA 的 mRNA 相對表達量和 SIgA 含量，但對其他細胞因子的分泌無顯著影響，表明適當水平的發酵酒糟可以促進蛋鴨腸道黏蛋白和免疫球蛋白的分泌，抵御病原微生物侵襲。這可能是因為，酒糟發酵飼料中的乳酸菌、芽孢桿菌、酵母菌等可以通過調節腸道菌群平衡和刺激腸道組織產生免疫球蛋白，促進腸道淋巴細胞增殖，增強免疫應答，提高機體的免疫力。本試驗中，飼糧添加 4% 發酵酒糟提高了蛋鴨空腸蛋白酶活性，提高了其對蛋白質的利用效率，降低了后腸段殘留蛋白質的含量。有研究報道，提高腸道蛋白質利用率會降低后腸道與蛋白質分解相關菌群豐度，降低后腸道微生物發酵腸道殘余的蛋白質產生的吲哚、組胺、硫化氫、糞臭素等有害代謝產物，緩解腸道細胞結構損傷，同時降低機體免疫反應。本研究中，飼糧添加 2% 和 4% 發酵混合飼料對蛋鴨細胞因子分泌無顯著影響。這可能是不同方法所獲得麩皮多糖的結構類型、理化性質、得率和活性有差異，有待進一步研究。綜上所述，本試驗條件下，以酒糟為底物的發酵酒糟在調節蛋鴨腸道免疫功能、改善蛋鴨腸道健康方面優于以玉米、豆粕和麩皮為底物的發酵混合飼料。

4 結論

在本試驗條件下，發酵酒糟對蛋鴨產蛋性能、蛋品質、腸道消化酶活性和免疫功能優于發酵混合飼料，且以 4% 的添加水平效果更好。

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