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導讀

    纈氨酸(Val)作為家禽功能性必需支鏈氨基酸之一，是肉雞玉米－豆粕型飼糧的第4限制性氨基酸。有研究表明，Val能夠抑制組織蛋白的降解，改善畜禽胴體品質，且能通過影響免疫器官的發育及免疫球蛋白的合成來影響免疫功能;此外，Val在畜禽特殊生理時期能夠促進糖異生作用，從而調節哺乳母豬的泌乳性能。有研究表明，肉雞飼喂低蛋白質的氨基酸平衡飼糧不僅未影響其生長性能，還改善了屠宰性能并提高了干物質及粗蛋白質的代謝率，減少了糞便中干物質及氮的排出量。肉雞營養研究者配制低蛋白質飼糧時主要考慮補充賴氨酸(Lys)、蛋氨酸、蘇氨酸和色氨酸，較少關注Val。隨著低蛋白質飼糧配制中Lys、蛋氨酸、蘇氨酸和色氨酸的大量使用，Val將成為肉雞飼糧的主要限制性氨基酸。但迄今為止關于肉雞低蛋白質飼糧Val應用研究尚少見報道。因此，本文研究低蛋白質飼糧補充Val對肉雞生長和營養代謝的影響，為肉雞低蛋白質飼糧配方設計和應用提供參考。

1.1 試驗材料

      試驗所用Val 來自于希杰第一制糖( CJ Cheiljedang Corporation) ，含量為98%。

1.2 試驗設計與試驗飼糧

     選取300 只1 日齡健康愛拔益加( AA) 肉公雞，隨機分成5 個組( Ⅰ～Ⅴ組) ，每組6 個重復，每個重復10 只雞。試驗各組前期( 1 ～ 21 日齡) 和后期( 22 ～ 42 日齡) 飼糧粗蛋白質水平分別為19.55% 和17.67%，Lys 水平分別為1.17% 和1.01%。前期和后期各組Val /Lys 值分別設置為68%、73%、78%、83%和88%，并通過調節基礎飼糧中Val 與載體的添加量達到預設水平，配制前后檢測飼料原料及各組飼糧氨基酸含量，各組飼糧中Lys 和Val 含量以及Val /Lys 值見表1，試驗基礎飼糧參考《雞飼養標準》( NY /T 33—2004) 配制，基礎飼糧組成及營養水平見表2。試驗期42 d。

1.3 飼養管理

    試驗在中國農業科學院南口中試基地試驗雞場進行。采用3 層重疊式籠養，自由采食，自由飲水，人工24 h 光照，水循環式暖氣供熱，前3 d 雞舍溫度維持在33 ℃，此后每周降低2 ℃，直到24 ℃，并維持在24 ℃。試驗雞舍良好通風。飼養管理參照《AA 肉雞飼養管理規程》進行。1 日齡接種馬立克疫苗，7 日齡滴鼻接種新城疫和腎傳支二聯苗。

1.4 指標測定與方法

1.4.1 飼糧原料成分檢測  

     按照AOAC( 2003) 標準測定飼糧原料和飼糧中粗蛋白質和氨基酸含量。粗蛋白質含量采用凱氏定氮法測定。樣品經鹽酸水解用氨基酸自動分析儀( L－8800，日本) 測定15 種氨基酸含量，經甲酸氧化用氨基酸自動分析儀測定含硫氨基酸含量，經氫氧化鈉水解用反相液相色譜儀( Waters2690，MA，美國) 測定色氨酸含量。

1.4.2 生長性能

    在肉雞42 日齡時，以重復為單位進行稱重，統計試驗期間各重復耗料量，計算平均日增重( ADG) 、平均日采食量( ADFI) 和料重比( F /G) 。

1.4.3 屠宰性能

    42 日齡時，每重復選取1 只接近平均體重肉雞，記錄活重，頸靜脈放血屠宰，按《家禽生產性能名詞術語和度量統計方法》( NY /T 823—2004) 測定屠宰率、全凈膛率、腿肌率、胸肌率和腹脂率。

1.4.4 血清生化指標和游離氨基酸含量的測定

     在肉雞42 日齡時，以重復為單位挑選與平均體重接近的公雞各1 只，頸靜脈采血10 mL，4 ℃、3 000 r /min 離心15 min 分離血清，用日立7600 全自動生化分析儀測定血清總蛋白( TP) 、白蛋白( ALB) 、球蛋白( GLB) 、總膽固醇( TC) 、甘油三酯( TG) 、尿酸( UA) 和葡萄糖( Glu) 含量。血清中總超氧化物歧化酶( T-SOD) 、過氧化氫酶( CAT) 活性和丙二醛( MDA) 含量均采用試劑盒測定，試劑盒購于南京建成生物工程研究所，操作步驟按照說明書進行。血清游離氨基酸含量使用S7130 AminoAcid Ｒeagent Organizer 氨基酸全自動分析儀( Sykam 公司，德國) 測定，具體操作步驟: 樣品添加200 μL 磺基水楊酸( 10%) 混合均勻提取，然后加入甲醇使蛋白質沉淀，于4 ℃ 1 h 后，12 000 r /min離心20 min。適當稀釋后，將上清液通過0.25 μm 孔徑的過濾膜，然后直接注入分析儀用于游離氨基酸的測定。使用茚三酮作為三甲基苯的底物，流速為0. 09 mL /min，注射量為50 μL，波長為570 nm。

1.5 數據統計分析

    試驗數據采用SPSS 19.0 軟件中的one-way ANOVA 過程進行方差檢驗，Duncan 氏法進行各組間平均值的多重比較，以P＜0.05 作為差異顯著性判斷標準。采用曲線估計程序對飼糧Val /Lys值( x) 與生長性能指標( y) 進行線性和二次模型回歸分析，P＜0.05 表示差異顯著。

2.1 低蛋白質飼糧補充Val對肉雞生長性能的影響

    由表3可知，低蛋白質飼糧補充Val能顯著提高1～42日齡肉雞末體重(FBW)和ADG(P＜0.05)，對肉雞ADFI無顯著影響(P＞0.05);與Ⅰ組相比，Ⅳ組F/G顯著降低(P＜0.05);隨著飼糧Val水平的提高，肉雞LBW、ADG和F/G均呈二次曲線變化趨勢(P＜0.05)。當Val/Lys值分別為80.07%和81.03%時，1～42日齡肉雞分別能獲得最大ADG和最優的F/G。

3.1 低蛋白質飼糧補充Val對肉雞生長性能的影響

     低蛋白質飼糧是依據動物的理想氨基酸模式配制的，即飼糧中蛋氨酸、Lys等必需氨基酸滿足動物需要量才能達到不因降低飼糧粗蛋白質水平而影響生長性能的效果。本試驗結果顯示，低蛋白質飼糧補充Val具有顯著提高肉雞ADG及降低F/G的效果，該試驗結果與Tavernari等、Nascimento等、Corzo等和Berres等研究報道相似。Tavernari等研究表明，當前期(8～21日齡)和后期(30～42日齡)飼糧粗蛋白質水平分別為20%和18%時，飼糧補充Val對前期、后期肉雞的ADG和F/G均有顯著改善效果。Nascimento等研究報道，當后期(21～42日齡)飼糧粗蛋白質水平降到16.5%時，通過補充Val，其ADG和F/G能達到與粗蛋白質水平為18.5%的對照組一樣效果。本試驗表明，低蛋白質飼糧補充Val能提高肉雞ADFI，可能與Val能夠調節下丘腦食欲的神經元阿黑皮素原及胃底腺黏膜膽囊收縮素的mＲNA表達量有關。低蛋白質飼糧補充Val改善肉雞生長性能的原因可能是飼糧中蛋氨酸、Lys、蘇氨酸和色氨酸等必需氨基酸滿足肉雞需要量時Val成為限制性氨基酸，補充Val起到了平衡飼糧氨基酸的作用。此外，Val與異亮氨酸、亮氨酸同屬肉雞必需支鏈氨基酸，飼糧中亮氨酸的含量往往高于肉雞需要量，飼糧補充Val能夠起到抵消支鏈氨基酸之間的拮抗作用，從而提高飼糧氨基酸的利用率。

     Mack等研究報道，以20～40日齡羅斯208肉雞為研究對象時，飼糧Val/Lys推薦值為80%。Corzo等對羅斯308肉雞生長前期(1～14日齡)、中期(15～28日齡)和后期(29～42日齡)的Val需要量進行了研究，其Val/Lys推薦值分別為77%、78%和75%。Tavernari等研究表明，科寶(Cobb)500肉雞生長前期和后期的可消化Val/Lys推薦值分別為77%和76%。本研究結果表明，當飼糧Val/Lys值分別為80.07%和81.03%時，AA肉雞獲得最大ADG和最小F/G，該Val/Lys值與Mack等推薦值較接近。造成這種差異的原因可能是肉雞品種、生長階段和飼糧營養水平的不同。

3.2 低蛋白質飼糧補充Val對肉雞屠宰性能的影響

     屠宰性能是營養物質在不同組織或同一組織不同部位中沉積量差異的一項指標，而胸肌率、腿肌率是肉雞產肉量的重要指標。目前已有的關于飼糧補充Val對肉雞屠宰性能影響的研究結果并不一致。Tavernari等和Duarte等研究報道，飼糧Val/Lys水平對Cobb500肉雞屠宰率、胸肌率和腿肌率無顯著影響。Corzo等研究結果表明，當飼糧Val水平由0.64%遞增至0.99%時，羅斯308肉雞屠宰率、胸肌率和腿肌率呈二次曲線增加。本研究中，盡管Val對肉雞FBW和ADG有顯著影響，但對肉雞屠宰性能無顯著影響。

3.3 低蛋白質飼糧補充Val對肉雞血清生化及抗氧化指標的影響

     血清TP和ALB有維持血漿滲透壓、組織蛋白動態平衡、血液pH穩定以及運輸營養物質等作用，GLB與機體免疫力有密切聯系，血清中ALB/GLB可反映機體營養和免疫狀況。陳熠研究報道，飼糧中補充Val能顯著提高哺乳母豬第10天及第18天血清ALB含量。此外Azzam等試驗發現，當飼糧中Val達到0.8%時能顯著提高蛋雞血清中ALB和TP含量。在本試驗中，Ⅱ～Ⅴ組肉雞血清中TP、ALB和GLB含量與Ⅰ組相比僅體現在數值上的提高但不顯著。家禽血清中的UA主要來源于家禽體內蛋白質、氨基酸和核酸的分解代謝，所以血清UA含量能反映家禽的蛋白質利用情況。本試驗結果顯示，Ⅱ～Ⅴ組肉雞血清UA含量與Ⅰ組相比均有下降，且呈先下降后上升的趨勢，當Val/Lys值為83%時，血清UA含量最低，表明適量補充Val提高肉雞對飼糧粗蛋白質的利用效率，而過量補充Val反而降低飼糧粗蛋白質的利用。

     本試驗發現當飼糧Val/Lys值為73%、83%和88%時，能顯著提高血清中Glu含量。代臘等研究發現，當飼糧中Val水平為0.8%時血清中Glu含量最高，且顯著高于其他組。王勇研究發現，當哺乳母豬連續21d飼喂Val/Lys值為120%的飼糧時可使血清中Glu含量提高。Val能提高血清Glu含量的作用可能與其代謝途徑有關，飼糧中的Val被動物消化吸收后，雖然可以在肝臟直接進行分解代謝，但其主要是在肌肉組織中氧化降解。Val在轉氨基酶和α支鏈酮酸脫羧酶等作用下形成谷氨酰胺和琥珀酰輔酶A等產物，進入丙酮酸－葡萄糖的糖異生途徑，從而維持動物機體血糖平衡。

     CAT和T-SOD是機體主要的抗氧化酶，能清除機體內自由基，保護細胞免受損傷，機體內這2種酶活性的升高能夠有效抑制動物組織細胞脂質的過氧化和機體自由基的生成，是機體自我防御和免疫系統的重要酶的組成成分;脂質發生過氧化反應最終會形成MDA，通過測定其含量可以有效判斷機體內組織細胞脂質過氧化程度。本試驗表明，低蛋白質飼糧補充Val對血清中的CAT和T-SOD活性無顯著影響，但能顯著降低MDA含量。代臘等研究表明，隨著飼糧Val水平的升高，蛋雞血清中MDA含量先升高后顯著下降，在飼糧Val為0.8%時達到最大值;而血清中T-SOD活性先顯著降低后升高，在飼糧Val為0.7%時達到最小。王勇研究報道，飼糧補充Val能提高了母豬哺乳期間血清和母乳中總抗氧化能力和T-SOD活性，降低血清和母乳中MDA含量。這說明飼糧補充Val能夠提高畜禽的抗氧化能力，其調控機理尚需進一步的研究。

3.4 低蛋白質飼糧補充Val對肉雞血清游離氨基酸含量的影響

     血清中游離氨基酸主要來源于組織蛋白質的降解及腸道對飼糧營養物質的消化吸收，其含量在一定程度上可以反映出動物體內氨基酸的代謝狀況;當飼糧氨基酸水平不能滿足動物需要時，血清游離氨基酸含量偏低。Ｒen等研究報道，飼糧中補充某種氨基酸時，血清中該氨基酸水平也相應升高。本試驗結果發現，隨著飼糧Val水平升高，血清中Val含量呈先升高后平穩的趨勢，Ⅱ～Ⅴ組與Ⅰ組相比均有所提高;且當飼糧Val/Lys值為78%時，血清中Lys、色氨酸和苯丙氨酸等必需氨基酸含量均比其他組高，其原因可能為此時飼糧氨基酸更加趨于平衡，肉雞對飼糧中氨基酸的利用率提高，從而血清中氨基酸含量提高。研究表明，在氨基酸代謝過程中支鏈氨基酸因共用支鏈氨酸轉氨酶和脫氫酶使得3種氨基酸之間存在拮抗作用，在本試驗中也得以證明，當Val/Lys值較高(83%和88%)時，血清中的異亮氨酸和亮氨酸含量均低于Ⅰ組。