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1 材料與方法

1.1 材 料

構(gòu)樹葉：野外采集，曬干后粉碎。

纖維素酶（3000 IU/g）由湖南某生化有限公司生產(chǎn)，主要成分是中性纖維素酶。

蛋白酶（6000 IU/g）由某物制品有限公司生產(chǎn)，主要成分是木瓜蛋白酶。

復(fù)合酶由河北滄州某獸藥有限公司生產(chǎn)，主要成分是纖維素酶、蛋白酶、木聚糖酶、木質(zhì)素酶和半纖維素酶等。

EM 原露由江西某生物技術(shù)有限公司生產(chǎn)，主要菌群是光合細(xì)菌、真菌和放線菌等。

三黃雞120日齡，平均體質(zhì)量約1.2kg。

1.2 方 法

1.2.1 發(fā)酵構(gòu)樹葉的制備

稱取200g 構(gòu)樹葉12份，分4個(gè)試驗(yàn)組，每組3個(gè)重復(fù)。分別添加0.1% 蛋白酶、0.1% 纖維素酶、0. 2% 復(fù)合酶和0.2%EM 菌種，并加入約60% 的水將構(gòu)樹葉混勻，然后壓實(shí)且真空密封貯存在2000mL廣口瓶中，將發(fā)酵物置于37 ℃恒溫箱中發(fā)酵6d。發(fā)酵后用常規(guī)方法處理和保存樣品，并按照董寬虎的《飼草生產(chǎn)學(xué)》進(jìn)行感官鑒定。

1.2.2 構(gòu)樹葉營養(yǎng)成分的測定

水分、粗蛋白、粗灰分、粗纖維、粗脂肪、鈣和磷等按常規(guī)分析方法測定，每次測定重復(fù)3次，測定誤差參照《飼料分析及飼料質(zhì)量檢測技術(shù)》介紹的方法進(jìn)行。

1.2.3 代謝試驗(yàn)

選取120 日齡健康的24只三黃雞，隨機(jī)分6組，每組4 個(gè)重復(fù)。1 組為對照組，2 組添加5 %的構(gòu)樹葉粉，3 組添加5% 復(fù)合酶發(fā)酵的構(gòu)樹葉粉，4 組添加5% 的蛋白酶發(fā)酵的構(gòu)樹葉粉，5 組添加5% 的EM 原露發(fā)酵的構(gòu)樹葉粉，6 組添加5% 的纖維素酶發(fā)酵的構(gòu)樹葉粉。

1.3 統(tǒng)計(jì)方法

采用SPSS（13.0）軟件進(jìn)行統(tǒng)計(jì)分析，統(tǒng)計(jì)軟件中的一般線性模型（GLM）進(jìn)行單因素方差分析，以LSD 法進(jìn)行平均數(shù)的多重分析，顯著性水平定為P < 0.05。

2 結(jié)果與分析

2.1 發(fā)酵處理對構(gòu)樹葉營養(yǎng)成分的影響

經(jīng)發(fā)酵6d 后的構(gòu)樹葉，外觀色澤黃綠，濕度適中，酒曲香味較濃，質(zhì)地柔軟松散。分析其營養(yǎng)成分發(fā)現(xiàn)，經(jīng)發(fā)酵處理后的構(gòu)樹葉粗灰分、粗脂肪、粗蛋白和游離氨基酸含量均比對照組高，粗纖維含量則有不同程度的下降。

從表2 可見：經(jīng)發(fā)酵處理的構(gòu)樹葉粗灰分含量均有所增加，并顯著高于對照組，不同處理間差異不顯著；發(fā)酵處理的構(gòu)樹葉粗脂肪含量增加，除了纖維素酶發(fā)酵組，其余各組均顯著高于對照組；經(jīng)發(fā)酵處理的構(gòu)樹葉粗纖維含量均有不同程度的下降，但與對照組相比，差異不顯著；其中，纖維素酶發(fā)酵的構(gòu)樹葉粗纖維含量比對照組下降10.8%，發(fā)酵處理的構(gòu)樹葉粗蛋白含量均顯著增加，且顯著高于對照組，用EM 發(fā)酵的構(gòu)樹葉粗蛋白含量最高，比對照組相比提高13.6% ；游離氨基酸含量以蛋白酶發(fā)酵的試驗(yàn)組最高，極顯著高于對照組，提高95.4 %，用纖維素酶和復(fù)合酶發(fā)酵的試驗(yàn)組亦顯著高于構(gòu)樹原葉，而用EM 發(fā)酵的試驗(yàn)組與對照組相比，差異不顯著。

2.2 發(fā)酵構(gòu)樹葉營養(yǎng)成分表觀消化率的比較

從表3 可見：三黃雞對各日糧的營養(yǎng)成分消化利用率無差異。粗蛋白、粗纖維、粗脂肪和磷的表觀消化率X-LBP-基礎(chǔ)日糧高于對照組和其他試驗(yàn)組（P >0.05），鈣的表觀消化率略低于基礎(chǔ)日糧組，但高于其他試驗(yàn)組（P >0.05）。靈山雞對纖維素酶發(fā)酵的構(gòu)樹葉消化利用率較好。EM、復(fù)合酶或蛋白酶發(fā)酵處理亦能改善靈山雞對構(gòu)樹葉營養(yǎng)物質(zhì)的消化利用。

3 討 論

3.1 不同發(fā)酵處理對構(gòu)樹葉營養(yǎng)成分的影響

構(gòu)樹葉是較好的蛋白質(zhì)飼料，但其蛋白質(zhì)結(jié)構(gòu)復(fù)雜，利用率不高，尤其是家禽和單胃動(dòng)物的消化道難降解，如何能有效利用構(gòu)樹葉資源并將其開發(fā)成新一代植物性蛋白飼料是當(dāng)前急需解決的問題之一。構(gòu)樹葉發(fā)酵處理主要是為了改變粗纖維、粗蛋白和游離氨基酸含量。試驗(yàn)表明：發(fā)酵處理可部分降解構(gòu)樹葉粗蛋白，增加粗蛋白和游離氨基酸含量，可提高構(gòu)樹的利用價(jià)值。

經(jīng)纖維素酶發(fā)酵的構(gòu)樹葉，粗纖維含量最低，復(fù)合酶次之，蛋白酶處理則對粗纖維降解作用不大。復(fù)合酶、EM 原露和蛋白酶的發(fā)酵效果不如纖維素酶，可能與酶制劑的種類和活性有關(guān)。復(fù)合酶制劑通常比單一酶制劑效果好，但并不意味著復(fù)合酶制劑中酶的種類愈多愈好。一般情況下，添加以內(nèi)源性消化酶為主的復(fù)合酶作用不明顯，添加以外源性酶為主的復(fù)合酶更有實(shí)際意義（鄧君明，2003）。

構(gòu)樹葉的蛋白結(jié)構(gòu)復(fù)雜，經(jīng)發(fā)酵作用，游離氨基酸含量極顯著增加，尤以蛋白酶的作用最明顯。推測木瓜蛋白酶是一種含巰基（- SH）肽鏈內(nèi)切酶，具有蛋白酶和酯酶的活性，對動(dòng)植物蛋白、多肽或蛋白質(zhì)有較強(qiáng)的水解能力，能產(chǎn)生更多的多肽或游離氨基酸（乙引，2000）；EM 原露是由多種微生物組成，發(fā)酵構(gòu)樹葉時(shí)，這些微生物可大量繁殖，不但菌體蛋白含量增加，還能分泌多種酶，從而有效提高發(fā)酵構(gòu)樹葉中的粗蛋白含量。

3.2 發(fā)酵構(gòu)樹葉蛋白和纖維的表觀消化率

構(gòu)樹葉利用率與粗纖維含量及蛋白質(zhì)結(jié)構(gòu)有關(guān)。粗纖維含量高不僅影響自身的消化，對其他營養(yǎng)成分的消化吸收也有不利影響，表現(xiàn)出抗?fàn)I養(yǎng)作用；構(gòu)樹葉蛋白結(jié)構(gòu)復(fù)雜直接影響腸道吸收，導(dǎo)致單胃動(dòng)物及家禽對營養(yǎng)物質(zhì)的利用率降低。

單胃動(dòng)物和家禽內(nèi)源性纖維素酶不足或缺乏，則可降低纖維素消化利用率、添加纖維素酶可補(bǔ)充內(nèi)源酶的不足，提高動(dòng)物對粗纖維的利用率。同時(shí)還可改善消化道酶系組成、酶量及活性，促進(jìn)小腸對營養(yǎng)物質(zhì)及與細(xì)胞壁結(jié)合的礦物質(zhì)的吸收。呂東海（2002）研究證實(shí)，家禽腸道微生物分解產(chǎn)生的可溶性非淀粉多糖能增加腸道食糜的黏度，導(dǎo)致食糜在消化道的滯留時(shí)間延長，進(jìn)一步促進(jìn)腸道后段微生物發(fā)酵，從而提高粗纖維的消化率。崔琰（2008）指出，纖維素及發(fā)酵產(chǎn)物的共同作用能刺激腸道蠕動(dòng)，促進(jìn)營養(yǎng)物質(zhì)的消化和吸收。從試驗(yàn)結(jié)果看，經(jīng)纖維素酶發(fā)酵的構(gòu)樹葉，纖維素和蛋白質(zhì)的表觀消化率最高，EM處理組次之，說明構(gòu)樹葉細(xì)胞壁可在纖維素酶或復(fù)合微生物作用下部分降解，從而促進(jìn)腸道對非淀粉多糖的消化吸收，提高粗纖維的利用率；與此同時(shí)，構(gòu)樹葉細(xì)胞壁部分裂解后，有利于改善腸道消化酶對蛋白質(zhì)的分解作用，增加游離氨基酸含量，提高蛋白質(zhì)的表觀消化率。

木瓜蛋白酶發(fā)酵雖然能增加構(gòu)樹葉游離氨基酸含量，但作為一種巰基蛋白酶，其對大豆蛋白以外的植物蛋白水解能力較差（陳曉春，2005），加上未經(jīng)過裂解細(xì)胞壁的屏障作用，單一木瓜蛋白酶發(fā)酵的構(gòu)樹葉的蛋白質(zhì)表觀消化率明顯低于纖維素酶組和EM 處理組；另外，由于構(gòu)樹葉本身的粗纖維含量較高，蛋白酶并不能降低日糧粗纖維含量，粗纖維的抗?fàn)I養(yǎng)作用也可使粗蛋白表觀消化率下降。

與基礎(chǔ)日糧組相比，添加5%構(gòu)樹葉的LBP組粗蛋白、粗纖維、粗脂肪和干物質(zhì)的表觀消化率均有一定程度的不良影響。發(fā)酵處理能有效提高靈山雞對構(gòu)樹葉營養(yǎng)物質(zhì)的消化吸收。

3.3 構(gòu)樹葉的應(yīng)用前景

我國飼料資源尤其是蛋白質(zhì)飼料短缺的矛盾較為突出。構(gòu)樹適應(yīng)性廣且抗逆性強(qiáng)，構(gòu)樹葉粗蛋白含量超過20%，作為一種非常規(guī)蛋白質(zhì)飼料資源有著良好的開發(fā)應(yīng)用前景。

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