1.4 試驗方法

1.4.1 發酵種子液的制備

從植物乳桿菌UR-3斜面挑取一環，接種到制備好的MRS液體培養基中，靜置 37℃培養24h后，吸取5%的菌種，轉到MRS液體培養基中，37℃靜置培養24h，最終制成發酵種子液。

1.4.2 發酵飼料的制作

將300g液體飼料（水料比2.5：1）裝入密封的塑料桶中，充分混合均勻后繼續接菌，放于振蕩培養箱中，按試驗條件進行發酵培養，經此處理所得的發酵飼料為乳酸菌FLF；同樣條件下，不接種植物乳桿菌處理的發酵飼料為對照組。

1.4.3 植物乳桿菌FLF發酵條件優化試驗

1.4.3.1 單因素試驗

選擇接種量、溫度、發酵時間3個優化條件進行單因素試驗的考查。

設定發酵時間72h，溫度34℃，研究1.0%、1.5%、2.0%、2.5%、3.0%、3.5%不同的接種量對液體飼料發酵效果的影響。設定發酵溫度34℃，接種量2.0%，研究24、48、72、96h不同的發酵時間對液體飼料發酵效果的影響。設定發酵時間72h，接種量2.0%，研究25、28、30、34、37℃不同的發酵溫度對液體飼料發酵效果的影響。

1.4.3.2 正交試驗

在單因素試驗的基礎上進行正交試驗，采用正交試驗L9（33），確定植物乳酸菌FL的最佳發酵組合條件。植物乳桿菌FLF正交試驗因素水平設計見表2。

1.4.4 測定方法

1.4.4.1 乳酸測定

乳酸測定的操作方法按照說明書進行。

1.4.4.2 生物量的測定

在超凈臺內取菌體斜面，在斜面內加5mL無菌水,用接種環刮下表面培養物制成菌懸液。用10倍梯度稀釋法將菌懸液稀釋成濃度分別為10-1、10-2、10-3、10-4、10-5、10-6、10-7、10-8不同濃度梯度后，充分振蕩，制成稀釋液。選擇3個合適的稀釋倍數，分別吸取3個稀釋度中菌懸液各0.2mL，涂布于完全凝固的平板計數培養基中，每個梯度稀釋做3個平行，倒置于37℃培養箱中培養2d后計數。

1.5 數據統計與分析

采用DPS軟件對試驗數據進行方差分析。

2.結果與分析

2.1 植物乳桿菌發酵對液體飼料營養水平的影響

2.1.1 接種量對植物乳桿菌FLF營養水平的影響

發酵時間72h，溫度34℃，研究接種量1.0%、1.5%、2.0%、2.5%、3.0%、3.5%對FLF營養價值的影響（見表3）。

由表3可知，植物乳桿菌接種量的不同，FLF的粗蛋白水平也不同；當接種量為 2.0%，粗蛋白含量達最大（6.60%），原因可能是植物乳桿菌液體發酵將飼料中的蛋白質分解成為許多小分子物質，此時乳酸含量和生物量顯著性提高（P<0.05），并達到最大值，分別為187.16mmol/L、17.94×109cfu/mL；但當接種量大于2%時，FLF中粗蛋白含量有所下降，可能是FLF中的菌種達到飽和，相互之間競爭底物，從而不利菌種的存活，導致植物乳桿菌的生物量降低。所以，當發酵時間72h、溫度34℃、接種量2%時液體飼料發酵效果最佳。

2.1.2 發酵時間對植物乳桿菌FLF營養水平的影響

發酵溫度為34℃，接種量2%，研究發酵時間24h、48h、72h、96h對FLF營養水平的影響（見表 4）。

由表4可知，植物乳桿菌 FLF 可以使飼料中粗蛋白、乳酸含量和生物量相對提高。不同發酵時間（24、48、72、96h）條件下，飼料粗蛋白含量分別為6.41%、6.69%、6.58%、6.39%。當發酵48h時，粗蛋白含量達到最大值6.69%。在植物乳桿菌發酵初期會產生大量的乳酸，在24、48、72h3個時間點，FLF中乳酸含量分別 達到151.80、186.49、187.16mmol/L，48、72h與24h之間差異顯著（P<0.05）。研究發現，在發酵初期階段，由于有足夠多的營養物質進行發酵，植物乳桿菌的繁殖速度較快；但是在發酵后期72~96h，由于飼料中營養物質被逐漸損耗掉，無法滿足菌種正常生長的基本需要，生物量也隨之逐漸減少；同時，植物乳桿菌代謝產生乳酸受到抑制，產生的乳酸也逐漸減少。所以，為了更好地應用于液體飼料發酵的生產實踐中，選擇以最高的粗蛋白含量為標準，所以發酵溫度為34℃，接種量2.0%的情況下，植物乳桿菌 FLF 的最佳發酵時間為48h。

2.1.3 發酵溫度對植物乳桿菌FLF營養水平的影響

發酵時間72h，接種量2%，研究發酵溫度25、28、30、34、37℃對FLF營養水平的影響（見表5）。

由表5可知，隨著FLF發酵溫度的升高，粗蛋白含量也逐漸升高，當發酵溫度達 37℃時，粗蛋白達到最高（6.81%）。發酵溫度在25~37℃時，乳酸含量及生物量等指標均顯著性提高（P<0.05），溫度和各項指標呈正相關關系。

由表6、表7可知，植物乳桿菌液體發酵液中乳酸量和粗蛋白含量的極差（R）最大值，可以得出影響植物乳桿菌液體發酵因素的主次順序為：發酵時間>接種量> 發酵溫度，所以最佳發酵組合條件，即發酵時間為48h、接種量2.5%、溫度37 ℃。

2.2 正交試驗結果（見表6、表7）

2.3 植物乳桿菌 FLF 試驗前后飼料中各指標的比較（見表8）

由表8可知，液體飼料接種植物乳桿菌UR-3后，經過48h的發酵，粗蛋白、生物量和乳酸含量都顯著高于尚未發酵的FLF（P<0.05），這表明接種植物乳桿菌UR-3對發酵飼料中的營養物質進行高效率的發酵，產生大量的乳酸，此結論與肖軻的試驗結果一致。

3.討論

3.1 植物乳桿菌發酵對 FLF 營養水平的影響

植物乳桿菌發酵成本低、效果好、對飼料營養成分破壞較小，還能提高飼料的轉化率和畜禽生長性能以及飼料的品質。植物乳桿菌可以改善蛋白品質、產生促生長因子，其在發酵飼料過程中產生乳酸，并將大分子蛋白質降解為許多小分子物質。研究發現，在試驗中，發酵飼料粗蛋白含量均有升高的趨勢，可能是由于植物乳桿菌在液體發酵過程中，不僅分解部分蛋白質，同時還合成了一定量的蛋白質。

閆征等研究發現，乳酸菌的生長受到抑制和乳酸產量下降的直接原因是終產物乳酸的不斷積累。熊素玉等研究發現，乳酸菌在pH值6.5~8.5、40℃培養時生長狀態好，而且發酵葡萄糖和乳糖產生乳酸，降低基質的pH值，乳酸菌的生長從而受到抑制。在本研究中，植物乳桿菌液體飼料發酵前期代謝率提高，有許多乳酸產生；在植物乳桿菌液體飼料發酵中后期，植物乳桿菌代謝漸緩，乳酸量減少。這與許梅等的試驗結論一致。

3.2 發酵條件對 FLF 營養水平的影響

發酵溫度是影響FLF營養價值的重要條件之一。在本試驗中，發酵溫度在 25~37℃時，各項指標顯著性高（P<0.05），溫度和各項指標呈正相關關系，但是我們未做37℃以上溫度條件的發酵試驗，因為發酵溫度太高，就會使菌種的繁殖速度快，菌種會快速老化，最終會影響FLF產品的品質。

發酵時間是影響FLF營養價值的主要條件，發酵時間太短不利于菌種的生長繁殖，從而影響飼料中粗蛋白含量；若發酵時間太長，菌種會將蛋白質降解成氨揮發掉，進而降低飼料中粗蛋白含量。

接種量決定FLF效果的好壞：接種量過少，發酵時雜菌會飛速生長，最終導致發酵失敗；接種量過高，有益菌相互之間底物競爭，會降低產品品質。

3.3 有待進一步研究的問題

本研究對植物乳桿菌UR-3在液態發酵飼料中的應用作了初步的研究,目前該研究方向的相關報道較少，要使FLF進入工業化生產和商品化階段還有許多研究工作要做，需要解決的問題還有很多。

大量試驗表明，FLF作為一種新型的綠色環保飼料，不但以改善飼料的營養特性、提高仔豬的生產性能，而且能改善仔豬的腸道康并預防腹瀉。雖然目前FLF的相關研究尚處在初期探索階段，并局限于斷奶仔豬方面，但是相信隨著FLF加工機械和設備的不斷發展，生產技術的不斷完善，FLF將是一種理想的抗生素促生長因子替代品。

4.結論

本試驗通過正交試驗，確定了時間、溫度、接種量對植物乳桿菌FLF營養價值的影響。植物乳桿菌FLF的最佳發酵工藝組合條件為：發酵時間48h、接種量2.5%、溫度37℃。植物乳桿菌發酵飼料粗蛋白含量顯著高于未發酵飼料（P<0.05），粗蛋白含量由發酵前6.28%提高到6.94%；發酵飼料乳酸菌數量和乳酸含量顯著高于未發酵飼料（P<0.05），乳酸含量達到212.34mmol/L，生物量為21.62×109cfu/mL。本研究為植物乳桿菌制備液體發酵飼料提供合理的應用技術參數，并為乳酸菌FLF產品的研發、應用和推廣提供參考數據。

豬場發酵全價飼料變水料飼喂技術

今天給大家介紹豬場如何發酵全價飼料進行水料飼喂。

其實操作很簡單，將豬全價飼料（商品全價顆粒飼料、粉料均可，也可以自配全價飼料）與飲水采取1:3的比例，每噸豬全價飼料（干）加入0.5-1包“99多功能飼料發酵劑”（500克/包，市場售價約25元），加入發酵罐后進行攪拌混合均勻，在25℃以上發酵罐中密閉發酵6小時以上，直接飼喂。可以早上飼喂完后發酵下午飼喂的料，下午飼喂完后發酵第二早上飼喂的料，如此循環進行。

豬場全價料發酵技術優勢：

提高飼料利用率，料肉比減低0.3左右；根據豬場個性需求和豬場非常規飼料原料，例如可以加入牧草、果渣、豆渣等進行飼喂，這些廉價飼料可以使用比例一般在10%-30%。還可以加入中草藥到其中（如“御瘟湯”，每噸豬飼料加入1-1.5公斤效果更好）。

豬場臭味氨氣少，常見疾病發病率顯著降低，降低飼料和用藥養殖成本，減少抗生素使用投入形成無抗養殖，提高養殖效益。

改善肉的品質，保水好，豬肉口感好。

發酵成水料后，可以進行人工、半自動、自動化液態飼喂系統。

規模化養殖可以采用自動化液態飼喂系統，這種模式采用自動化稱重技術，將每天所需飼料和飲水以1:3的比例配好;通過自動計量，將每圈豬所需飼料直接供到豬舍;

自動化液態飼喂系統優勢：通過發酵，預防濕料霉變;無需飼養人員搬運飼料，節省飼養人工成本;解決了粉劑飼料的浪費問題，減少呼吸道疾病發病率。

發酵設備成本低，操作簡單，易操作，普通飼養員都能學會;還可以充分使用果渣、豆渣、蔬菜葉、牧草等食品下腳料等廉價飼料，降低養殖成本;解決飼養人員不足及難管理的問題。

各種養豬規模的養殖場都可以運用。

下圖是廣西助農公司在南寧市武鳴區的客戶現場圖，這個客戶主要以發酵廉價飼料+配合飼料的飼喂模式。

下圖是廣西助農公司在桂林市荔浦縣客戶的現場圖，這個客戶全部使用短時間發酵全價飼料+養豬專用復合益生菌+水飼養黑豬。

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