復(fù)合菌種協(xié)同蛋白酶發(fā)酵豆粕的研究表明可改善腸道,提高適口性,增強牲畜免疫能力
為了提高豆粕飼料的品質(zhì),采用3種益生菌協(xié)同中性蛋白酶固態(tài)發(fā)酵豆粕,并對其發(fā)酵工藝條件進行優(yōu)化。結(jié)果顯示,枯草芽袍桿菌、嗜酸乳桿菌和產(chǎn)朊假絲酵母的最佳接種種齡為34 h,料水比為1:0.7,三種益生菌的添加比例為5:2:2加入0.1%中性蛋白酶與益生菌協(xié)同發(fā)酵,粗蛋白、酸溶蛋白和肽含量分別增加了20.25%、 26%和23.69%;發(fā)酵后的豆粕中抗原蛋白大幅度減少,游離氨基酸含量提高了13倍,豆粕的質(zhì)量得到明顯改善。
豆粕是大豆榨油后獲得的副產(chǎn)品,其中不僅含有豐富的粗蛋白質(zhì),而且氨基酸組成多樣,符合畜禽對氨基酸的需求,因此,豆粕被大量用于飼用蛋白原料。但是大豆中存在多種抗?fàn)I養(yǎng)因子,會影響機體對營養(yǎng)的吸收,直接飼喂導(dǎo)致蛋白質(zhì)生物轉(zhuǎn)化率較低,這些抗?fàn)I養(yǎng)因子限制豆粕在動物飼料中的應(yīng)用;另外,豆粕中的過敏原蛋白也限制了豆粕在動物飼料中的應(yīng)用。因此,需要將豆粕中大分子蛋白轉(zhuǎn)變成肽類物質(zhì)和氨基酸等小分子物質(zhì),進而提高飼料蛋白的利用率。
目前,被廣泛采用處理豆粕的方法有酶解法和微生物發(fā)酵法。微生物發(fā)酵以豆粕為主要原料,使用細(xì)菌和真菌進行發(fā)酵,并經(jīng)干燥制成的蛋白質(zhì)飼料。用于發(fā)酵的菌種主要有細(xì)菌和真菌,細(xì)菌主要是乳酸菌類和芽孢桿菌類,真菌主要是酵母類和霉菌類。豆粕經(jīng)發(fā)酵后,豆粕中的抗?fàn)I養(yǎng)因子被大幅度減少,提高了動物消化吸收水平,并減少豆粕中其他營養(yǎng)成分的流失;而且微生物發(fā)酵產(chǎn)生的益生菌對動物腸道健康改善、降低抗生素使用等方面均有顯著效果。不同微生物對豆粕蛋白質(zhì)有不同的水解能力,且單菌發(fā)酵能力普遍較低,多菌種固態(tài)發(fā)酵是一種有效提高豆粕蛋白質(zhì)水解度的方式。酶解法利用蛋白酶將蛋白分解為多肽,產(chǎn)品具有肽類含量高、免疫活性強等特點,但易產(chǎn)生苦味物質(zhì),影響適口性。菌酶協(xié)同發(fā)酵即采用蛋白酶對豆粕進行處理,然后加入微生物進行發(fā)酵,避免單獨使用微生物發(fā)酵產(chǎn)酶不足的缺點,在發(fā)酵過程酵母菌和乳酸菌會產(chǎn)生多種香味物質(zhì)和有機酸,不僅調(diào)節(jié)產(chǎn)品的苦味,改善飼料適口性,同時發(fā)酵后的豆粕具有抑菌能力,從而延長產(chǎn)品的保質(zhì)期。
本研究采取菌酶協(xié)同發(fā)酵法制備豆粕飼料,選用了枯草芽孢桿菌、產(chǎn)朊假絲酵母和嗜酸乳桿菌作為發(fā)酵菌種,同時選用了中性蛋白酶對豆粕進行酶解,以發(fā)酵豆粕中肽和酸溶蛋白含量的變化為指標(biāo),優(yōu)化了菌酶協(xié)同發(fā)酵豆粕的工藝。
1、材料與方法
1.1主要試劑和原料
豆粕、麥麩、玉米粉購自農(nóng)貿(mào)市場,粉碎后過40目篩;中性蛋白酶≥200U/mg、胰蛋白胨、蛋白胨、酵母粉、葡萄糖、牛肉膏、10% SDS、30% Acr-Bis、TEMED。
1.2菌種
枯草芽孢桿菌、產(chǎn)朊假絲酵母、嗜酸乳桿菌均為本實驗室保藏菌種。
1.3培養(yǎng)基
LB培養(yǎng)基:胰蛋白胨10 g.氯化鈉10 g、酵母粉5 g、蒸餾水1 L、YPD培養(yǎng)基:蛋白胨20g、酵母粉10 g、葡萄糖20g、蒸餾水1L。MRS培養(yǎng)基、蛋白胨l0g、牛肉膏8g、酵母粉4g、葡萄糖20g、檸檬酸三銨2g、CH3COONa5g、K2HP042g、MgS040.5g、MnSO40.2g、吐溫801mL、蒸餾水1L。
1.4儀器
K1305A型自動定氮儀;UV-2100紫外分光光度計;TG16-W微量臺式高速離心機;A300氨基酸自動分析儀。
1.5實驗方法
1.5.1種子的制備
將枯草芽孢桿菌接種于YPD液體培養(yǎng)基中,置于150r/min搖床,30℃培養(yǎng)34 h;嗜酸乳桿菌接種于MRS液體培養(yǎng)基,置于37℃恒溫培養(yǎng)箱培養(yǎng)34 h;產(chǎn)朊假絲酵母接種于YPD液體培養(yǎng)基,置于200 r/min搖床,28℃培養(yǎng)34 h。
1.5.2固態(tài)發(fā)酵豆粕
將豆粕、麥麩、玉米粉按90:5:5的比例分裝于500 mL燒杯中,115℃滅菌30 min,冷卻后,按5%接種量將種子液接入,加適量無菌水和糖蜜并攪拌均勻后,于37℃靜置培養(yǎng)發(fā)酵7天,每隔24 h取一次樣,樣品60℃烘干、粉碎后-20℃保存。
1.5.3菌體生物量和pH測定
取不同發(fā)酵時間的樣品1.0g,加50 mL蒸餾水,置于180r/min搖床中震蕩20 min,過濾,取上清液用pH計進行測定。
1.5.4發(fā)酵豆粕指標(biāo)測定
粗蛋白和酸溶蛋白含量測定采用凱氏定氮法,分別參照GB/T 6432-2018飼料中粗蛋白的測定方法和GB/T 22492-2008大豆肽的測定方法;總游離氨基酸含量的測定采用茚三酮顯色法;多肽含量=酸溶蛋白含量-總游離氨基酸含量。
1.5.5感官評價
參照感官分析標(biāo)準(zhǔn)GB21172-2007和農(nóng)業(yè)行業(yè)標(biāo)準(zhǔn)NYT 2218-2012,將適量樣品倒入干凈的平皿中,通過眼觀、鼻嗅、手捻等方法,分別評定樣品的顏色、氣味和質(zhì)地。具體標(biāo)準(zhǔn)見表1。
1.5.6游離氨基酸分析
樣品處理步驟參考NY/T1975-2010,采用氨基酸自動分析儀,根據(jù)全自動氨基酸分析儀A300操作步驟進行。
2、結(jié)果與分析
2.1最佳接種時間的確定
根據(jù)圖1可知,嗜酸乳桿菌和產(chǎn)朊假絲酵母從32h后處于穩(wěn)定期,枯草芽孢桿菌34h后處于穩(wěn)定期。考慮到方便實際的實驗操作,故選用34h為菌種的最佳接種時間。
2.2最適料水比的確定
基質(zhì)含水量影響培養(yǎng)系統(tǒng)中的氧氣供應(yīng)、氣體流動等,是關(guān)系到發(fā)酵成敗的制約因素。根據(jù)豆粕發(fā)酵的感官評價表,不同料水比下的發(fā)酵情況得分見表2,結(jié)果顯示料水比為1:0.7和1:0.8發(fā)酵效果無明顯差異。當(dāng)培養(yǎng)基中的水分過低會導(dǎo)致氧氣不足,營養(yǎng)也不能很好地溶于水中,導(dǎo)致其利用率降低;而水分太多會導(dǎo)致基質(zhì)多孔性降低,不利于物料內(nèi)熱量的散發(fā)和氧氣的傳遞,影響菌的生長和繁殖,且含水量過高也會增加后期的干燥成本。因此確定枯草芽孢桿菌、產(chǎn)朊假絲酵母、嗜酸乳桿菌發(fā)酵的最適料水比為1:0.7。
2.3優(yōu)勢菌種的確定
測定料水比為1:0.7、接種量為5%、發(fā)酵時間為72h的枯草芽孢桿菌、產(chǎn)朊假絲酵母、嗜酸乳桿菌的粗蛋白含量,其結(jié)果如圖2所示,枯草芽孢桿菌、產(chǎn)朊假絲酵母和嗜酸乳桿菌經(jīng)過72h發(fā)酵后粗蛋白含量分別增加了12.2%, 6.6%和3.2%,確定枯草芽孢桿菌為優(yōu)勢菌株。枯草芽孢桿菌在發(fā)酵中產(chǎn)生中性蛋白酶和堿性蛋白酶且酶活力較為強盛,發(fā)酵豆粕由弱酸性轉(zhuǎn)變?yōu)閴A性;酵母菌在整個發(fā)酵過程中pH值變化范圍較小呈偏弱酸性;乳酸菌在發(fā)酵過程中可產(chǎn)生大量有機酸如乳酸、乙酸和丙酸等,且時間越長作用越明顯,這導(dǎo)致其pH值下降,但乳酸菌主要是利用碳水化合物通過生成的淀粉酶、纖維素酶等作用產(chǎn)酸及其他風(fēng)味物質(zhì),而分泌的蛋白酶系比較少。
2.4混菌比例的確定
分別采用枯草芽孢桿菌、產(chǎn)朊假絲酵母和嗜酸乳桿菌之間比例為5:2:2、5:3:2、5:2:3,連續(xù)發(fā)酵7天,每隔24 h取一次樣,測定樣品中的粗蛋白、酸溶蛋白及肽含量的變化。由圖3可知,發(fā)酵過程中粗蛋白含量都是呈先上升后下降趨勢,在120 h達(dá)到最大值,比發(fā)酵前分別增加了19%、14.1%和13.1%。圖4和圖5顯示酸溶蛋白和肽含量在5:2:2最高,比發(fā)酵前分別增加了17.47%和15.86%。綜合考慮,三菌株間比例為5:2:2最好。
2.5菌酶協(xié)同發(fā)酵對豆粕品質(zhì)的影響
在枯草芽孢桿菌:產(chǎn)朊假絲酵母:嗜酸乳桿菌=5:2:2的基礎(chǔ)上添加0.1%中性蛋白酶,探討菌酶聯(lián)合對豆粕發(fā)酵品質(zhì)的影響。由圖6可知,發(fā)酵后粗蛋白、酸溶蛋白和肽含量分別增加了20.25 % , 26%和23.69%。菌酶聯(lián)合發(fā)酵與混菌發(fā)酵相比,粗蛋白、酸溶蛋白、肽含量分別提高了1.25%、8.53%和7.83%,菌酶聯(lián)合發(fā)酵后效果明顯。
2.6蛋白降解情況分析
因為豆粕中含有多種抗?fàn)I養(yǎng)因子,導(dǎo)致動物消化不良和腸道微生物不平衡,其中抗原蛋白含量較多,豆粕中抗原蛋白主要由β-球蛋白((7s)和大豆球蛋白(lls)組成,7S蛋白是由三個亞基a(約67 kD)、a '(約71kD)、β(約50 kD)組成,11S蛋白是由酸性亞基(約40kDa)和堿性亞基(約20 kDa)組成。從圖7可以看出,該豆粕中存在7S和11S蛋白,豆粕經(jīng)過混菌發(fā)酵和菌酶協(xié)同發(fā)酵后,分子量約為97.2kD的蛋白含量提高,但是7S和11S在兩種發(fā)酵條件下都得到大幅度減少,其中混菌+中性蛋白酶的發(fā)酵效果較好。
2.7氨基酸含量變化分析
蛋白質(zhì)中必需氨基酸含量的高低是衡量蛋白質(zhì)品質(zhì)好壞的重要指標(biāo)之一。取發(fā)酵后的豆粕樣品為實驗組,發(fā)酵前的樣品為對照組,按照NY/T 1975-2010樣品處理對豆粕進行前處理,然后通過氨基酸自動分析儀對樣品中的氨基酸進行測定,結(jié)果如表3所示。發(fā)酵前檢測出11種氨基酸,含量為1.522 mg/100 mg,發(fā)酵后檢測出16種氨基酸,為21.886 mg/100 mg,游離氨基酸含量提高了13倍。
3、討論
本試驗利用枯草芽孢桿菌、產(chǎn)朊假絲酵母、嗜酸乳桿菌固態(tài)發(fā)酵豆粕,并結(jié)合中性蛋白酶處理,對豆粕的發(fā)酵過程進行處理,優(yōu)化了發(fā)酵工藝條件。菌酶協(xié)同發(fā)酵處理后,可有效提高豆粕粗蛋白含量、肽含量、酸溶蛋白和游離氨基酸含量,與未發(fā)酵豆粕相比,粗蛋白、酸溶蛋白和肽含量分別增加了20.25 %,26%和23.69%;而與混菌發(fā)酵相比,菌酶協(xié)同處理后粗蛋白、酸溶蛋白和肽含量分別提高了1.25%,8.53%和7.83%,菌酶聯(lián)合發(fā)酵豆粕效果顯著。
通過菌酶協(xié)同作用,使豆粕中大分子蛋白得到一定程度的降解,提高了豆粕中的小肽含量,小肽被分解為氨基酸、多肽和氨等小分子物質(zhì),并去除了多種抗?fàn)I養(yǎng)因子,有利于畜禽對豆粕的消化和吸收;在發(fā)酵過程中,由于酵母菌和乳酸菌的作用,使豆粕具有香味和一定的酸度,避免了添加酶帶來的不適口感,改善了豆粕的適口性,具有刺激食欲和增強牲畜免疫能力的作用。在微生物發(fā)酵過程中,采用的乳酸菌、酵母菌和芽孢桿菌是益生菌,這些益生菌可以改善畜禽腸道的微生態(tài)環(huán)境,抑制牲畜腸道有害菌群的繁殖,維持腸道益生菌群平衡,降低牲畜腹瀉率。
通過蛋白酶的分解作用也能夠提高豆粕蛋白產(chǎn)生小肽物質(zhì),其中有些小肽具有較好的免疫活性,常用的有酸性蛋白酶、堿性蛋白酶、中性蛋白酶等,其中中性蛋白酶價格便宜,且具有一定的脫苦作用,在飼料工業(yè)常作為酶解豆粕的酶制劑。目前,菌酶協(xié)同處理表現(xiàn)出了極大的優(yōu)勢,也成為了關(guān)注熱點。張煌等(2018)通過菌酶協(xié)同發(fā)酵,能夠顯著改善豆粕的品質(zhì)。周爽等(2016)利用枯草芽孢桿菌和中性蛋白酶協(xié)同發(fā)酵豆粕,發(fā)酵后的豆粕其小肽含量得到大幅度提高。目前采用單菌種協(xié)同酶處理的發(fā)酵研究較多,但混菌發(fā)酵可以彌補單菌發(fā)酵的不足,能夠更好地提高豆粕的營養(yǎng)和降低生長抑制因子。本研究主要集中在混菌發(fā)酵和中性蛋白酶聯(lián)合處理工藝的研究,后續(xù)可以采用其他蛋白酶聯(lián)合處理,并篩選出最佳的發(fā)酵溫度、PH、接種量等工藝參數(shù),從而獲得更好的豆粕發(fā)酵工藝。
實戰(zhàn)操作技術(shù)——棉菜籽餅脫毒變身優(yōu)質(zhì)飼料替代豆粕操作新技術(shù)
當(dāng)前豆粕價格很高有些地方貨源緊缺,而棉菜籽餅(棉籽粕、菜籽粕)價格相對便宜,棉菜籽餅是棉子、油菜籽榨油后剩下的餅狀殘渣,蛋白質(zhì)含量較高,含有各種氨基酸成分。但由于棉菜籽餅中含有植酸、芥子堿等物質(zhì),這些物質(zhì)含有一定的毒性,還會影響動物的消化吸收,不能大量使用,因此不建議直接飼喂給動物!
現(xiàn)在通過微生物飼料發(fā)酵劑的除毒脫毒技術(shù),可以成功將菜籽餅變?yōu)閮?yōu)質(zhì)添加飼料,直接按照1公斤發(fā)酵的棉菜籽餅(發(fā)酵前的重量)代替約0.85公斤豆粕進行使用。飼料發(fā)酵劑中的有益微生物,在發(fā)酵過程中分泌的代謝產(chǎn)物,可將棉菜籽餅中的毒性物質(zhì)等有效分解。
豆粕、菜粕、棉粕成分對比
1.豆粕是一種高蛋白原料,無需脫毒即可用作飼料。其中蛋白質(zhì)含量為40%-48%,賴氨酸含量為2.5%-3.0%,色氨酸含量為0.6%-0.7%,蛋氨酸含量為0.5%-0.7%。2020年11月12日報價每噸在3500元左右。
2.菜粕的粗蛋白含量在34%-38%之間,特點是蛋氨酸含量高(僅次于芝麻餅、粕),賴氨酸含量亦高。而精氨酸含量低,是餅、粕飼料中含量最低的。菜籽粕的有效能值偏低(淀粉含量低、菜籽殼難以消化利用)。礦物質(zhì)中,鈣和磷的含量均高,硒和錳的含量亦高。特別是硒的含量是常用植物飼料中最高的。2020年11月12日報價每噸在2900元左右。
3.棉粕蛋白質(zhì)含量一般為44.32%,僅次于豆粕的蛋白質(zhì)含量48%,而高于菜籽粕的蛋白質(zhì)含量36.04%。精氨酸含量高達(dá)3.6%-3.8%,而賴氨酸含量僅有1.3%-l.5%,只有豆粕的一半。2020年11月12日報價每噸在3000元左右。
是否需要脫毒處理
1.豆粕無需經(jīng)過脫毒即可用作飼料。而且豆粕中富含蛋白質(zhì)和多種氨基酸,在不需要額外加入動物性蛋白的情況下,僅豆粕中含有的蛋白質(zhì)和氨基酸足以平衡家禽和豬的食譜,促進它們的營養(yǎng)吸收。只有當(dāng)其他粕類單位蛋白成本遠(yuǎn)低于豆粕時,豆粕才有可能被替代。
2.菜粕菜籽中含有硫葡萄糖苷、芥酸、單寧、皂角苷等不良成分,其中主要是硫葡萄糖苷。硫葡萄糖苷本身無毒,但在一定溫度和水分條件下,經(jīng)過菜籽本身含有的芥子酶的酶解作用而產(chǎn)生異硫氰酸酯、唑烷硫酮和腈類等有害物質(zhì)。這些物質(zhì)可引起甲狀腺腫大,從而造成動物生長速度下降,繁殖力減退。單寧則妨礙蛋白質(zhì)的消化,降低適口性。而芥酸阻撓脂肪代謝,造成心臟脂肪蓄積及生長受到抑制。。使用前需進行一定的脫毒處理,并且使用時要加以限制,具體喂量應(yīng)根據(jù)菜粕中有害成分含量而定。經(jīng)過脫毒處理的菜籽粕喂量可以加大,而“雙低”油菜籽生產(chǎn)的菜粕喂量要受限制。同時,應(yīng)結(jié)合菜粕的氨基酸組成特點,適當(dāng)搭配其它餅粕。
3.棉籽中含有對動物有害的棉酚及環(huán)丙烯脂肪酸,尤其是棉酚的危害很大。在制油過程中,由于蒸炒,壓榨等熱作用,大部分棉酚與蛋白質(zhì)、氨基酸結(jié)合而變成結(jié)合棉酚,結(jié)合棉酚在動物消化道內(nèi)不被動物吸收,故毒性很小。另一部分棉酚則以游離形式存在于餅、粕及油品中,這部分游離棉酚對動物毒性較大,尤其單胃動物過量攝取或攝取時間較長,可導(dǎo)致生長遲緩、繁殖性能及生產(chǎn)性能下降,甚至導(dǎo)致死亡。幼小動物對棉酚的耐受能力更低。由于棉籽餅、粕中游離棉酚對動物有害,因此,在使用棉餅、粕時,要根據(jù)飼喂對象及餅粕中游離棉酚的含量加以限量。反芻家畜在有優(yōu)質(zhì)粗料及多汁青料的情況下,棉籽餅、粕的用量不受限制,不會造成中毒。對單胃動物要限制喂量,最好使用經(jīng)過脫毒處理的棉籽餅粕。同時,使用棉籽餅、粕配制飼糧要注意氨基酸平衡,尤其是棉籽餅、粕的賴氨酸含量低,且利用率差,應(yīng)注意添加賴氨酸。
發(fā)酵操作技術(shù)
發(fā)酵棉菜籽餅其實也是一個脫毒技術(shù),具體操作如下:
1.仔細(xì)檢查棉菜籽餅,剔除棉菜籽餅中嚴(yán)重變質(zhì)發(fā)霉的部分,輕度發(fā)霉的原料可以忽略,因為微生物發(fā)酵能夠脫霉。
2.將棉菜籽餅粉碎并添加適量的玉米粉淀粉類的能量飼料等,調(diào)節(jié)飼料營養(yǎng)比例。
3.每噸棉菜籽餅加入2公斤食鹽、玉米粉(其它淀粉、面粉次粉等也可以,或者粉碎的生紅薯300公斤也可以)100公斤、“99多功能飼料發(fā)酵劑”1包(500g/包,市場售價約25元,以高濃度乳酸菌、酵母菌、復(fù)合酶制劑的專業(yè)發(fā)酵劑)。
4.在混合物料中添加適量水分,使混合物料含水量保持在55%左右,以“手抓一把并緊握,無水滴落,松手后輕觸即散”為宜,一般上述配方中需要加入清水約500-600公斤。
5.發(fā)酵方式根據(jù)實際環(huán)境條件各異,在桶、缸、塑料袋等容器中發(fā)酵均可。
6.發(fā)酵時要盡可能排盡空氣進行密封發(fā)酵。如果使用的發(fā)酵容器有密封不嚴(yán)實的隱患,要在一開始就在其外層包裹一層塑料袋并扎緊。發(fā)酵過程中不能啟封。
7.發(fā)酵時間受環(huán)境溫度影響,通常夏季發(fā)酵2-3天,冬季發(fā)酵5-7天即可完成。發(fā)酵完成后,有較為強烈的酸香味,ph值在3-4。
規(guī)模運用混合發(fā)酵現(xiàn)場
塑料缸、飼料袋(有內(nèi)膜)均可做發(fā)酵飼料
采用池子發(fā)酵
發(fā)酵完成的棉菜粕飼喂動物技術(shù)
需要注意的是,發(fā)酵后的飼料酸度較低,不可以取代禽畜全部日糧。其他類發(fā)酵飼料同理。飼喂時根據(jù)不同情況,將發(fā)酵飼料按照一定比例添加到日糧中,發(fā)酵完成的棉菜粕為濕料,具體使用量每大概1.5-2公斤發(fā)酵棉菜粕(濕料)代替動物日糧配方中1公斤豆粕的使用量進行代替使用,與其它飼料混合后直接飼喂,由于棉菜籽粕蛋白較高,最高使用量不要超過禽畜日糧飼喂量的40%(濕料重量)。如果發(fā)現(xiàn)發(fā)酵飼料過酸適口性變差,可在飼喂前在陽光下曬1-2小時,或添加適量的碳酸氫鈉(小蘇打)即可改善。
發(fā)酵過程中與發(fā)酵后使用過程中,發(fā)酵的容器要一直保持密封狀態(tài),可以長時間保存(一年左右)。
當(dāng)前養(yǎng)殖業(yè)成本高居不下,而飼料成本是其中最高的,利用廉價原料發(fā)酵飼料(包括一些輕度發(fā)霉的粕類低價收回)是極佳解決辦法。通過微生物飼料發(fā)酵劑的發(fā)酵作用,可以將輕度霉變飼料變成優(yōu)質(zhì)飼料,將不易消化的物質(zhì)分解為可被畜禽吸收的小分子糖類、氨基酸等。同時發(fā)酵飼料中富含有益微生物、酶制劑、酸化劑等,可調(diào)節(jié)畜禽腸胃微生態(tài)環(huán)境并進一步提高飼料利用率。發(fā)酵飼料氣味清香,提高了飼料的適口性,加上發(fā)酵飼料中有大約4℃的酒度,能夠促進動物新陳代謝促進健康抵御疾病,是當(dāng)前養(yǎng)殖業(yè)發(fā)展中重要的一環(huán)。
本技術(shù)也可以同樣發(fā)酵菜籽粕(餅)、棕櫚粕等,方法同上。
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