1.3 試驗設計及試驗動物 

試驗選擇性別 ( 公牛 ) 相同、品種 ( 荷斯坦 ) 相同、體重 [(500±25)kg]相近的荷斯坦公牛 20頭，按體重隨機分為 2組， 對照組不添加復合微生物制劑，試驗組每頭牛添加 80g/d 復合 微生物制劑試驗預試期 7d，正試期 55d。單欄飼養。試驗前對 場地進行消毒，并對供試牛進行驅蟲。飼養過程中飼喂全混合 日糧，每日早晚各飼喂 1 次，自由飲水。

1.4 樣品采集及處理 

于正試期的第15天開始，采用全收糞法連續收集 7d 新鮮糞便，用10%硫酸固氮，65℃烘干后粉碎并自封袋保存，用以測定養分表觀消化率。試驗中期利用口腔插管法抽取瘤胃液，5層紗布過濾后 -80℃保存，用以測定酶活性。試驗結束當日清晨空腹采集靜脈血，每頭牛采血10mL，3000r/min 離心10min，血清 -20℃冷凍保存，用以測定糖脂代謝指標。

1.5 測定指標

1.5.1 生長性能測定 

每次飼喂時準確稱量飼糧的投喂量和剩余量，并于試驗正式開始和結束時清晨空腹稱重，用以計算干物質采食量、平均日增重以及料重比。

1.5.2 養分表觀消化率測定

飼糧和糞樣中的干物質(DM)、粗蛋白質(CP)、中性洗滌纖維(NDF)和酸性洗滌纖維(ADF)含量的測定參照《飼料分析及飼料質量檢測技術》的方法進行。采用酸不溶灰分(AIA)作為內源指示劑進行養分表觀消化率的計算，計算公式如下：某養分表觀消化率 =1-bc/ad。式中：a為飼糧中該養分的含量；b為糞樣中該養分的含量；c為飼糧中AIA的含量；d為糞樣中AIA的含量。

1.5.3 瘤胃液中消化酶活性測定 

瘤胃液中木聚糖酶、果膠酶、濾紙酶活性采用3、5- 二硝基水楊酸比色法測定。取0.5%相應底物溶液0.5mL，加入0.5m酶液，45℃水浴5min，迅速加入3、5- 二硝基水楊酸(DNS)溶液終止反應，煮沸5min后取出加入蒸餾水10mL搖勻，在分光光度計上550mm處比色。瘤胃液中蛋白酶、脂肪酶和淀粉酶活性采用試劑盒測定，試劑盒均購于上海勁馬試驗設備有限公司，主要儀器為HWS-12型水浴鍋、721型分光光度計、恒溫箱和PL6906型酶標儀。

1.5.4 血清糖脂代謝指標測定 

血清中尿素氮、葡萄糖、膽固醇、甘油三酯含量按照試劑盒說明書進行測定，主要儀器為恒溫箱和PL-6906型酶標儀。

1.6 數據分析

試驗所得數據用Excel 2010進行初步整理，再用SPSS 19.0統計軟件進行方差分析，并用Duncan氏法進行多重比較。P＜0.05為差異顯著，P＜0.01為差異極顯著。

2 結果

2.1 復合微生物制劑對育肥牛生長性能的影響 

由表2可知，與對照組相比，試驗組干物質采食量與平均日增重分別提高2.74%和28.95% (P＜0.05)，試驗組料重比降低23.27% (P=0.06)。

2.2 復合微生物制劑對育肥牛營養物質表觀消化率的影響 

由表3可知，與對照組相比，試驗組干物質表觀消化率無顯著差異 (P＞0.05)，但是試驗組粗蛋白質表觀消化率提高1.56% (P＜0.05)，中性洗滌纖維表觀消化率提高1.93% (P＜0.05)。

2.3 復合微生物制劑對育肥牛瘤胃消化酶活性的影響

由表4可知，與對照組相比，試驗組瘤胃液中蛋白酶和淀粉酶活性分別提高8.87% (P＜0.01)和0.27% (P＜0.05)，試驗組瘤胃液中果膠酶活性提高18.63%(P＜0.01)，但是試驗組瘤胃液中脂肪酶、木聚糖酶和濾紙酶活性差異不顯著 (P＞0.05)。

2.4 復合微生物制劑對育肥牛血清糖脂代謝指標的影響 

由表5可知，與對照組相比，試驗組血清中葡萄糖含量提高11.67% (P＜0.01)，膽固醇和甘油三酯含量分別提高22.91%和12.84% (P＜0.01)。

3 討論

3.1 復合微生物制劑對育肥牛生長性能的影響

作為營養物質吸收的直接表現，增重效果一直以來都是人們關注的重點。本試驗中，試驗組平均日增重比對照組提高28.95%，說明所添加的復合微生物制劑對荷斯坦公牛的增重效果有顯著的促進作用。而采食量的提升是提高增重效果的基礎，在本試驗中，試驗組干物質采食量比對照組提高2.74%。采食量和日增重的提升可能是由于所添加的復合微生物制劑對瘤胃的發酵起到了一定的調控作用。相關研究表明，枯草芽孢桿菌和地衣芽孢桿菌能夠產生豐富的蛋白酶、淀粉酶、細胞壁裂解酶和半纖維素酶等，通過改善消化道內生理過程來促進營養物質的消化吸收，從而提高動物的生長性能。本試驗中，試驗組料重比也有明顯的降低，這說明復合微生物制劑不只是通過采食量的增加促使日增重的提升，而且對飼糧的消化吸收也具有調控作用。飼料轉化率的提高可能來源于2方面因素：一是復合微生物制劑提高了瘤胃對營養物質的消化能力；二是其促進了機體對營養物質的吸收轉運以及儲備能力，其具體的作用機理還有待進一步探究。

3.2 復合微生物制劑對育肥牛養分表觀消化率的影響 

養分消化率的改善是提高動物生長性能的基礎。反芻動物進食后，飼糧首先在瘤胃內進行微生物發酵，然后再進入其他胃室進行消化。其養分的消化主要依賴于瘤胃微生物的降解。本試驗中，干物質表觀消化率提升的并不顯著，但是粗蛋白質和中性洗滌纖維表觀消化率分別提升1.56%和1.93%，其原因可能是由于試驗所用復合微生物制劑對瘤胃有益菌的快速繁殖起到積極的調節作用。因為酵母能夠提高瘤胃內白色瘤胃球菌和黃色瘤胃球菌的數量，從而提高纖維降解酶的活性，而枯草芽孢桿菌能夠提高瘤胃蛋白分解菌和淀粉分解菌的數量，促進蛋白質和淀粉的降解。碳源和氮源的降解速度同時提高，可以為瘤胃內的有益菌群繁殖提供充足且均衡的物質基礎。

3.3 復合微生物制劑對育肥牛瘤胃消化酶活性的影響 

蛋白酶是瘤胃內促進蛋白質降解的一類活性物質的總稱。瘤胃內豐富的蛋白酶系統及較高的酶活性是蛋白質消化吸收的首要條件。因為能夠進入小腸被消化吸收的蛋白質1/2以上來自微生物蛋白，而飼糧中的植物蛋白質要在瘤胃內完成降解和微生物合成2個過程才能轉化為微生物蛋白。在本試驗中，試驗組瘤胃液中蛋白酶活性比對照組提高8.87%，說明本試驗所采用的復合微生物制劑對提高瘤胃蛋白酶活性有顯著功效。因為其中包含的微生物不僅在自身繁殖的過程中能夠產生蛋白酶，而且能夠促進瘤胃固有的蛋白降解菌產生蛋白酶。本試驗中，復合微生物制劑對瘤胃液中脂肪酶活性沒有顯著影響，但是提高了瘤胃液中淀粉酶活性，其原因可能是由于復合微生物制劑促進瘤胃微生物繁殖的過程中，瘤胃微生物菌群需要快速獲得更多的能源物質而形成反饋調節，促使淀粉快速降解提供能源和前體物。復合微生物制劑還提高了瘤胃液中果膠酶的活性，這可能是中性洗滌纖維消化率得到改善的直接原因。因為果膠是初生細胞壁和次生細胞壁間纖維素、半纖維素的黏接物，果膠酶活性提高能夠促使果膠的降解，為纖維降解提供有利條件。但是本試驗中木聚糖酶和濾紙酶活性并未發生明顯改變，其原因可能是微生物的效能還不足以使粗纖維的降解發生明顯變化，或是微生物的快速繁殖使飼糧降解速度加快，在瘤胃內停留時間變短，酶的作用時間不足所致。

3.4 復合微生物制劑對育肥牛血清糖脂代謝指標的影響

血液中膽固醇和甘油三酯的含量是衡量脂類代謝的重要指標，血液中的葡萄糖除了直接為機體供能以外，還會以糖原或脂類的形式保存于機體當中。本試驗血清中膽固醇及甘油三酯含量顯著升高的原因是由于進入血液的葡萄糖含量升高還是添加劑促進了脂類的直接攝入還有待深入研究。反芻動物瘤胃中的乳酸含量提升后會迅速轉化為丙酸，隨后被動物吸收，再進入肝臟異生為葡萄糖供機體使用。本試驗瘤胃中淀粉酶活性增高，為乳酸菌發酵提供了充足的糖類物質基礎，同時，添加劑中的酵母又能夠促進乳酸菌的快速繁殖，可使大量的乳酸轉變為丙酸而被吸收，再由肝臟異生為糖，這可能是本試驗中血清葡萄糖含量顯著升高的原因。

4 結論 

本試驗中的復合微生物制劑對荷斯坦公牛的干物質采食量和增重效果都有促進作用，能夠在一定程度上改善料重比，并且復合微生態制劑能夠提高部分瘤胃消化酶活性，改善營養物質的消化吸收。

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